[发明专利]一种人类红细胞血型系统ABO抗原的多重PCR-SBT基因分型方法及试剂有效
| 申请号： | 201811609618.2 | 申请日： | 2018-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN109554448B | 公开（公告）日： | 2019-08-30 |
| 发明（设计）人： | 朱发明;应燕玲;洪小珍;何吉;许先国;陈舒;马开荣 | 申请（专利权）人： | 浙江省血液中心 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 刘晓春 |
| 地址： | 310052 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人类红细胞 血型系统 多重PCR 基因分型 抗原 定型 基因分型检测 医学研究单位 抗原基因 抗原系统 输血医学 现实意义 药学研究 高通量 遗传学 分型 应用 开发 研究 | ||
1.一种人类红细胞血型系统ABO抗原的多重PCR-SBT基因分型方法，其特征在于：所述方法对ABO抗原基因全部1-7号外显子进行分组多重PCR扩增和测序分型，并包括以下步骤：
(1)设计并合成多重PCR扩增引物，其包含ABO抗原基因特异性序列和通用接头序列；
(2)制备人基因组DNA；
(3)两组多重PCR反应扩增人基因组DNA中ABO抗原基因1-7号外显子序列；
(4)将步骤(3)得到的扩增产物进行双酶切纯化；
(5)提供寡核苷酸测序引物，将步骤(4)得到的双酶切纯化产物进行测序PCR反应；
(6)将步骤(5)得到的测序产物进行醋酸钠-乙醇沉淀法纯化，并进行毛细管电泳测序；
(7)将步骤(6)获得的序列通过软件分析，确定其基因型。
2.如权利要求1所述的人红细胞血型系统ABO抗原的多重PCR-SBT基因分型方法，其特征在于：所述步骤(1)中多重PCR扩增引物序列分别为：
ABO基因1号外显子扩增引物：
ABO-E1F 5’-TTCCAAAATGTCGTAATAACGCCGTCCCTTCCTAGCAG-3’
ABO-E1R 5’-ATTATAGAGGACACCTAGTCGGCGGTAGGTGCTGAAAATA-3’
ABO基因2号外显子扩增引物：
ABO-E2F 5’-TGTAAAACGACGGCCAGTGTAAAGTGGGGCAGGTGAGA-3’
ABO-E2R 5’-CAGGAAACAGCTATGACCTGATACTTGGGGAGCTCAGG-3’
ABO基因3号外显子扩增引物：
ABO-E3F 5’-ACGTGGGTATAAGAGGCGACCAACAGGCAGTCTTCGTT-3’
ABO-E3R 5’-CGATGCTAGACGATCCAGTGTAGGGGTGAGAGCAAAGG-3’
ABO基因4号外显子扩增引物：
ABO-E4F 5’-TCTAAAAGCTGCGGAATTGTTGCCCTAAATCCTGCTCCTA-3’
ABO-E4R 5’-TCCAAACTCATCAATGTATCGCTGCAGGACAATTCTGTGA-3’
ABO基因5号外显子扩增引物：
ABO-E5F 5’-TCTAAAAGCTGCGGAATTGTGTCAATGCCCAGTCATGGTT-3’
ABO-E5R 5’-TCCAAACTCATCAATGTATCGGAAACCGCCCTCTAATACC-3’
ABO基因6号外显子扩增引物：
ABO-E6F 5’-TGTAAAACGACGGCCAGTGGAGGMAGAAGCTGAGTGGAG-3’
ABO-E6R 5’-CAGGAAACAGCTATGACCCCTACCMTCTGGGAGGACAA-3’
ABO基因7号外显子扩增引物：
ABO-E7F 5’-AGGASTCGCTCAGGACAGG-3’
ABO-E7R 5’-CCRGTTCTGCTAAAACCAAG-3’。
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