[发明专利]一种检测ATP的比色方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测ATP的比色方法及试剂盒。该比色方法通过将已知浓度的ATP溶液和待测溶液分别与H₂O₂、显色剂和含氢离子的小分子溶液混合，反应；依据已知浓度的反应产物的颜色，判断待测溶液反应产物中是否含有ATP；以及将已知浓度的反应产物和待测溶液反应产物在相同波长下检测，将已知浓度的反应产物的检测值制作标准曲线，依据标准曲线和待测溶液反应产物的检测值，得到待测溶液中的ATP的浓度。依据该比色方法，本发明还提供了一种检测ATP的试剂盒，包括H₂O₂检测液、显色剂检测液、含氢离子的小分子检测液和ATP标准溶液。本发明提供的方法简单、便宜、快速、且灵敏。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种检测ATP的比色方法及试剂盒。

背景技术

ATP(adenosine triphosphate)，中文为腺嘌呤核苷三磷酸(简称三磷酸腺苷)，是一种不稳定的高能化合物，由1分子腺嘌呤，1分子核糖和3分子磷酸组成。ATP在生物体内发挥着重要的作用，是所有生物体生存和细胞繁殖的能量来源。研究发现，ATP可以作为细胞存活率和细胞损伤的指示剂，其在生物体细胞中的浓度与肿瘤、心血管疾病、帕金森综合征等重大疾病有关。目前，ATP的检测还被普遍用于微生物的快速检测、疾病的诊断与预防、食品分析等领域。

检测ATP的方法有主要包括高效液相色谱法、核酸适配体法、荧光素/荧光素酶法以及电泳法等。这些方法的灵敏度和特异性都很好，但是需要昂贵的仪器和繁琐的操作步骤，并且耗时耗力。因此，研究一种简单快速检测ATP的方法具有重要的意义。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种检测ATP的比色方法。

本发明的另一目的在于提供一种检测ATP的试剂盒。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种检测ATP的比色方法，包括如下步骤：

(1)将若干个不同浓度的ATP溶液与H₂O₂、显色剂和含氢离子的小分子溶液混合，得到反应体系I，反应，得到已知浓度的反应产物；将待测溶液的原液或稀释液与H₂O₂、显色剂和含氢离子的小分子溶液混合，得到反应体系II，反应，得到待测溶液反应产物；

(2)依据已知浓度的反应产物的颜色，判断待测溶液反应产物中是否含有ATP，判断标准如下：若待测溶液反应产物的颜色与ATP为0的已知浓度的反应产物的颜色相当时，表示待测溶液不含ATP；若待测溶液反应产物的颜色比ATP为0的已知浓度的反应产物的颜色浅时，表示待测溶液中含有ATP；

(3)将步骤(1)得到已知浓度的反应产物和待测溶液反应产物在相同波长下检测；将已知浓度的反应产物的检测值制作标准曲线，依据标准曲线和待测溶液反应产物的检测值，得到待测溶液中的ATP的浓度。

步骤(1)中：

所述的反应体系I中的ATP的浓度优选为0～200μM；更优选为0μM以及0.01～50μM。

所述的含氢离子的小分子为酸；优选为盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、氢氟酸、氢溴酸、氢碘酸、氯酸、高氯酸、次氯酸、亚硫酸、柠檬酸、草酸、甲酸、丙酸和丁酸中的一种或至少两种。

所述的显色剂指的是可以被过氧化氢氧化的有机试剂；优选为3,3,5,5-四甲基联苯胺(TMB)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和邻苯二胺中的一种或至少两种。

所述的含氢离子的小分子的浓度，以氢离子的含量计算浓度，为1μM～10M；优选1M、0.5M、0.1M、0.05M、0.01M、0.005M、0.001M、500μM、50μM、1μM。