[发明专利]一种检测ATP的比色方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测ATP的比色方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将若干个不同浓度的ATP溶液与H₂O₂、显色剂和含氢离子的小分子溶液混合，得到反应体系I，反应，得到已知浓度的反应产物；将待测溶液的原液或稀释液与H₂O₂、显色剂和含氢离子的小分子溶液混合，得到反应体系II，反应，得到待测溶液反应产物；

（2）依据已知浓度的反应产物的颜色，判断待测溶液反应产物中是否含有ATP，判断标准如下：若待测溶液反应产物的颜色与ATP为0的已知浓度的反应产物的颜色相当时，表示待测溶液不含ATP；若待测溶液反应产物的颜色比ATP为0的已知浓度的反应产物的颜色浅时，表示待测溶液中含有ATP；

（3）将步骤（1）得到已知浓度的反应产物和待测溶液反应产物在相同波长下检测；将已知浓度的反应产物的检测值制作标准曲线，依据标准曲线和待测溶液反应产物的检测值，得到待测溶液中的ATP的浓度。

2.根据权利要求1所述的检测ATP的比色方法，其特征在于：步骤（1）中所述的反应体系I中ATP的浓度为0～200μM。

3.根据权利要求1所述的检测ATP的比色方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的含氢离子的小分子为酸；

步骤（1）中所述的显色剂指的是能被过氧化氢氧化的有机试剂。

4.根据权利要求3所述的检测ATP的比色方法，其特征在于：

所述的含氢离子的小分子为盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、氢氟酸、氢溴酸、氢碘酸、氯酸、高氯酸、次氯酸、亚硫酸、柠檬酸、草酸、甲酸、丙酸和丁酸中的一种或至少两种；

所述的显色剂为3,3,5,5-四甲基联苯胺、2 ,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐和邻苯二胺中的一种或至少两种。

5.根据权利要求1所述的检测ATP的比色方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的含氢离子的小分子的浓度，以氢离子的含量计算浓度，为1µM～10M；

步骤（1）中所述的显色剂的浓度为0.001mM～50 mM；

步骤（1）中所述的H₂O₂的浓度为0.001mM～1000 mM；

步骤（1）中所述的反应的温度为0～100℃；

步骤（1）中所述的反应的时间为1min～24h。

6.根据权利要求5所述的检测ATP的比色方法，其特征在于：

所述的含氢离子的小分子的浓度为1M、0.5M、0.1M、0.05M、0.01M、0.005M、0.001M、500µM、50 µM或1µM；

所述的显色剂的浓度为0.001 mM、0.01 mM、0.1 mM、1 mM、10 mM或50 mM；

所述的H₂O₂的浓度为0.001 mM、0.01 mM、0.1 mM、1 mM、10 mM、50 mM、100 mM、500mM或1000 mM；

所述的反应的温度为室温；

所述的反应的时间为1min～24h。

7.根据权利要求1所述的检测ATP的比色方法，其特征在于：

步骤（3）中所述的波长为400～450nm。

8.根据权利要求7所述的检测ATP的比色方法，其特征在于：

所述的波长为420nm。

9.一种检测ATP的试剂盒，其特征在于：是基于权利要求1～8任一项所述的比色方法设计得到，包括以下成分：H₂O₂检测液、显色剂检测液、含氢离子的小分子检测液和ATP标准溶液。