[发明专利]一种诱导牙髓干细胞向心肌样细胞分化的方法

说明书

本发明属于干细胞领域，公开了一种诱导牙髓干细胞向心肌样细胞分化的组合物及方法。本发明所述诱导牙髓干细胞向心肌样细胞分化的组合物，由5‑氮杂胞苷和PFT‑a组成。本发明所述诱导牙髓干细胞向心肌样细胞分化的方法，为牙髓干细胞预培养后更换含FBS和本发明所述诱导牙髓干细胞向心肌样细胞分化的组合物的DMEM/F12培养基诱导培养，然后更换含FBS的DMEM/F12培养基维持培养。所述牙髓干细胞自体取材方便，来源丰富，易于体外扩增，可以用于自体移植，从而避免了免疫排斥反应。实验表明本发明采用5‑氮杂胞苷和PFT‑a两种诱导因子联合应用作用于牙髓干细，能有效的诱导DPSCs向心肌样细胞分化。

技术领域

本发明属于干细胞领域，具体涉及一种诱导牙髓干细胞向心肌样细胞分化的方法。

背景技术

心肌梗死是由于冠状动脉循环改变引起冠脉血流和心肌需求之间不平衡而导致的心肌损坏，是临床上一种严重的缺血性心脏病。坏死后的心肌细胞逐渐被瘫痕组织所取代，由于瘫痕组织缺乏弹性，难以满足心脏收舒功能的要求，为代偿损失心肌细胞的功能，心脏逐渐发生退行性左心室重塑，心功能下降，最终导致充血性心力衰竭，甚至猝死。临床药物和介入治疗虽可以改善症状，但却不能挽回受损的心肌细胞。心脏移植虽可以从根本上解决心室重构问题，但因为其供体受限，医疗费用太高而难以广泛应用。

近年来的研究表明，心肌细胞也具有再生能力，在心肌梗死后，心肌细胞也可以发生分裂和增值，但是，由于其增值能力较弱，不能满足弥补丧失心肌细胞数量的要求而逆转心室重构过程。近年来随着干细胞技术和组织工程学研究的不断深入，干细胞移植治疗心肌梗死成为临床研究的热点。干细胞的多向分化潜能及可塑性使心肌梗死心肌细胞再生成为可能。在人体的微环境作用下，干细胞定向归巢至损伤处，可以多项分化成各种组织细胞及血管。目前用于心肌梗死治疗研究的干细胞主要有骨髓间充质干细胞、胚胎干细胞、脐带间充质干细胞、脂肪干细胞等。

牙髓组织位于牙齿内部的牙髓腔内，是牙体组织中唯一的软组织。牙髓干细胞(dental pulp stem cell，DPSCs)为成体组织干细胞，Gronthos等人于2000年首次次报道从人的第三磨牙牙髓组织中提取，经体外培养获得集落状生长，形态呈梭形，可自我更新和体外可诱导分化形成成牙本质样结构一类间充质干细胞。DPSCs与骨髓来源等间充质干细胞相类似，具有多向分化的潜能，它除了能形成矿化结节能力的细胞外，经过不同细胞因子的诱导，还能够分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、血管内皮、肝、神经等细胞系类型。DPSCs取材方便、增值速度快，作为成体间充质干细胞中的一员，在体外使用合适的诱导剂同样具有分化为心肌样细胞的能力。DPSCs这种功能特性极大地吸引了来自基础医学和临床医学的研究者，给基础科学的研究者们提供了一种研究发展生物学的模式，DPSCs所具有的修复、替代和再生能力也为临床医学提供了一个发展新疗法的机会。目前对于DPSCs向心肌样细胞分化诱导的研究报道尚少，未见有效的诱导DPSCs向心肌样细胞分化的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种诱导牙髓干细胞向心肌样细胞分化的方法，以促使牙髓干细胞向心肌样细胞分化诱导。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种诱导牙髓干细胞向心肌样细胞分化的组合物，由5-氮杂胞苷和PFT-a组成。

5-氮杂胞苷(5-azacytidine，5-aza)是一种可改变基因的去甲基化药物,作为一种诱导剂常用于体外实验研究。5-aza是胞苷类似物，为DNA甲基转移酶抑制剂，当其作用于MSC时能整合进入DNA中，通过抑制DNA甲基转移酶使低DNA甲基化，而DNA的甲基化程度和基因调节密切相关。