[发明专利]用于检测呼吸道感染病原体的核酸试剂、试剂盒、系统及方法

权利要求书

1.一种用于检测呼吸道感染病原体的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1-24所示的引物和SEQ ID NO.27-45所示的探针。

2.根据权利要求1所述的核酸试剂，其中，相对于1μM的SEQ ID NO.1所示的引物，分别由SEQ ID NO.2-24所示的引物的含量各自为0.3-0.5μM、0.8-1.0μM、0.3-0.5μM、0.8-1.0μM、0.4-0.6μM、0.6-1.0μM、0.4-0.6μM、0.8-1.0μM、0.4-0.5μM、0.6-1.0μM、0.3-0.5μM、0.6-1.0μM、0.4-0.5μM、0.6-1.0μM、0.1-0.4μM、0.6-1.0μM、0.3-0.5μM、0.8-1.0μM、0.3-0.5μM、0.8-1.0μM、0.3-0.5μM、0.8-1.0μM和0.3-0.5μM，分别由SEQ ID NO.27-45所示的探针的含量各自为0.1-0.3μM、0.2-0.4μM、0.1-0.3μM、0.1-0.3μM、0.1-0.3μM、0.2-0.4μM、0.2-0.4μM、0.1-0.3μM、0.2-0.4μM、0.1-0.3μM、0.2-0.4μM、0.1-0.3μM、0.1-0.3μM、0.1-0.3μM、0.2-0.4μM、0.2-0.4μM、0.1-0.3μM、0.1-0.3μM和0.1-0.3μM。

3.根据权利要求1所述的核酸试剂，其中，所述核酸试剂还包括阳性内质控；

所述阳性内质控含有SEQ ID NO.25-26所示的引物和SEQ ID NO.46所示的探针。

4.根据权利要求3所述的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括A管、B管、C管和D管；A管含有SEQ ID NO.1-10,25-26所示的引物和SEQ ID NO.27-32,46所示的探针；B管含有SEQ IDNO.11-14,25-26所示的引物和SEQ ID NO.33-37,46所示的探针；C管含有SEQ ID NO.15-20,25-26所示的引物和SEQ ID NO.38-40,46所示的探针；D管含有SEQ ID NO.21-26所示的引物和SEQ ID NO.41-46所示的探针。

5.根据权利要求4所述的核酸试剂，其中，SEQ ID NO.27,29,33,34,38,41,42所示的探针具有第一荧光标记；SEQ ID NO.28,30,35,36,39,43,45所示的探针具有第二荧光标记；SEQ ID NO.31,32,37,40,44所示的探针具有第三荧光标记；SEQ ID NO.46所示的探针具有第四荧光标记；所述第一荧光标记、所述第二荧光标记、所述第三荧光标记和所述第四荧光标记各不相同，且各自独立地选自FAM荧光标记、JOE荧光标记、CY5荧光标记、ROX荧光标记、HEX荧光标记、VIC荧光标记和Quasar670荧光标记中的一种。

6.根据权利要求1～5中任意一项所述的核酸试剂，其中，所述呼吸道感染病原体包括甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒A型、呼吸道合胞病毒B型、腺病毒、人副流感I型病毒、人副流感II型病毒、人副流感III型病毒、人副流感IV型病毒、人鼻病毒、人偏肺病毒、肺炎衣原体、肺炎支原体、嗜肺军团菌、冠状病毒NL63、冠状病毒HKUI、冠状病毒229E、冠状病毒OC43和博卡病毒中的至少一种。

7.一种用于检测呼吸道感染病原体的试剂盒，该试剂盒含有权利要求1～6中任意一项所述的核酸试剂，并且可选地，所述试剂盒还含有反应体系缓冲液、DNA聚合酶、逆转录酶、镁离子、dNTP和水中的至少一种。

8.权利要求1～6中任意一项所述的核酸试剂在制备用于检测呼吸道感染病原体的试剂盒中的用途。

9.一种用于检测呼吸道感染病原体的系统，该系统包括具有A管检测器、B管检测器、C管检测器和D管检测器的PCR仪、计算装置和输出装置，所述A管检测器、B管检测器、C管检测器和D管检测器分别为装载有权利要求4～6中任意一项所述的核酸试剂的核酸试剂储藏容器，所述PCR仪包括第一荧光通道、第二荧光通道、第三荧光通道和第四荧光通道，所述第一荧光通道、所述第二荧光通道、所述第三荧光通道和所述第四荧光通道各不相同，且各自独立地为FAM荧光通道、JOE荧光通道、CY5荧光通道、ROX荧光通道、HEX荧光通道、VIC荧光通道或Quasar670荧光通道；所述计算装置包括存储器和处理器，所述存储器中存储有计算机程序，所述处理器被配置为执行所述存储器中存储的计算机程序，以实现如下的判别：

若阳性对照成立，则检测结果有效；

若A管第一荧光通道有Tm值为69℃对应的溶解峰曲线判定为InfluA阳性；A管第一荧光通道有Tm值为60℃对应的溶解峰曲线判定为ADV阳性；A管第二荧光通道通道有Tm值为64℃对应的溶解峰曲线判定为InfluB阳性；A管第二荧光通道有Tm值为55℃对应的溶解峰曲线判定为HBoV阳性；A管第三荧光通道有Tm值为57℃的溶解峰曲线判定为RSVA阳性；A管第三荧光通道有Tm值为65℃的溶解峰曲线判定为RSVB阳性；A管第四荧光通道有Tm值为66℃的溶解峰曲线判定为阳性内质控合格；

若B管第一荧光通道有Tm值为63℃对应的溶解峰曲线判定为PIVI阳性；B管第一荧光通道有Tm值为56℃对应的溶解峰曲线判定为PIVII阳性；B管第二荧光通道有Tm值为59℃对应的溶解峰曲线判定为PIVIII阳性；B管第二荧光通道有Tm值为63℃对应的溶解峰曲线判定为PIVIV阳性；B管第三荧光通道有Tm值为65℃对应的溶解峰曲线判定为HRV阳性；B管第四荧光通道有Tm值为66℃的溶解峰曲线判定为阳性内质控合格；

若C管第一荧光通道有Tm值为59℃对应的溶解峰曲线判定为MP阳性；C管第二荧光通道有Tm值为55℃对应的溶解峰曲线判定为LP阳性；C管第三荧光通道有Tm值为68℃对应的溶解峰曲线判定为CP阳性；C管第四荧光通道有Tm值为66℃的溶解峰曲线判定为阳性内质控合格；

若D管第一荧光通道有Tm值为62℃对应的溶解峰曲线判定为HcoV-NL63阳性；D管第一荧光通道有Tm值为59℃对应的溶解峰曲线判定为HcoV-OC43阳性；D管第二荧光通道有Tm值为63℃对应的溶解峰曲线判定为HcoV-HKUI阳性；D管第二荧光通道有Tm值为55℃对应的溶解峰曲线判定为HMPV阳性；D管第三荧光通道有Tm值为69℃对应的溶解峰曲线判定为HcoV-229E阳性；D管第四荧光通道有Tm值为66℃的溶解峰曲线判定为阳性内质控合格。