[发明专利]一种抗罗非鱼免疫球蛋白IgM的单克隆抗体及其细胞株和应用

说明书

本发明公开了一种抗罗非鱼免疫球蛋白IgM的单克隆抗体及其细胞株和应用，本发明的抗罗非鱼IgM的单克隆抗体是由保藏编号为CCTCC NO：C2018244的杂交瘤细胞株Ti‑IgM‑B6分泌产生的，抗体效价大于1:10000，杂交瘤细胞株活性高，特异性高；而且利用单克隆抗体建立了检测罗非鱼湖病毒的间接ELISA方法，对罗非鱼疾病流行病学调查、病原诊断、疫病防控等具有较高的价值，为其他养殖鱼类疾病的防治提供参考。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗罗非鱼免疫球蛋白IgM的单克隆抗体及其细胞株和应用。

背景技术

罗非鱼产业是我省渔业发展和渔民增收的支柱品牌之一。但是，近年来罗非鱼病害频繁发生，如罗非鱼链球菌病、罗湖病毒病等，对全球罗非鱼养殖产业造成了巨大的经济损失，成为罗非鱼产业可持续发展的主要制约因素之一。疫病诊断是防控这些病害的重要工具和前提，目前，针对罗非鱼的主要病害，缺乏有效的现场快速检测方法。

抗体是脊椎动物的免疫系统在抗原的刺激下，由淋巴细胞所产生的可与相应的抗原发生特异性结合的免疫球蛋白，硬骨鱼类中已经报道的免疫球蛋白包括IgM、IgD、IgZ和IgT，其中IgM(免疫球蛋白M)是一类存在于所有有颌类脊椎动物中的抗体。

罗非鱼湖病毒的分离操作过程较为复杂，所需条件和技术也要求较高，难于广泛应用。现有方法检测是否存在病毒核酸，方法单一，经常导致假阳性和假阴性结果，难做到定量检测与确诊。因此，亟需建立一种罗非鱼湖病毒的高效快速的检测方法。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一株杂交瘤细胞株B6，已于2018年11月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC C2018244。生物材料样品的分类命名是Ti-IgM-B6，保藏单位地址为：中国典型培养物保藏中心。保藏编号为CCTCC NO：C2018244。

本发明的另一个目的是提供一种由上述保藏编号为CCTCC C2018244的杂交瘤细胞株分泌产生的抗罗非鱼免疫球蛋白IgM单克隆抗体。

本发明的另一个目的是提供一种罗非鱼湖病毒间接ELISA检测方法。

本发明所采取的技术方案是：

一株杂交瘤细胞株B6，于2018年11月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC C2018244。

一种抗罗非鱼免疫球蛋白IgM的单克隆抗体，是由上述保藏编号为CCTCCC2018244的杂交瘤细胞株分泌产生。

上述的单克隆抗体在制备检测罗非鱼免疫球蛋白IgM的产品中的应用。

上述的单克隆抗体在制备用于检测罗非鱼湖病毒的产品中的应用。

进一步的，所述产品包括试剂、试剂盒、芯片或试纸。

一种罗非鱼湖病毒间接ELISA检测试剂盒，该试剂盒含有上述所述的单克隆抗体。

进一步的，该试剂盒还包括：包被液、标准血清、洗涤液、HRP标记羊抗鼠抗体、TMB显色液、终止液、阳性对照品和阴性对照品。

一种罗非鱼湖病毒间接ELISA检测方法，包括如下步骤：

(1)将样品加在包被有罗非鱼湖病毒的ELISA酶标板中；

(2)封板后孵育；

(3)洗涤样品；

(4)将上述的单克隆抗体稀释后加到酶标板中；

(5)孵育、洗涤；

(6)稀释HRP标记羊抗鼠抗体，加到酶标板中；

(7)孵育、洗涤；