[发明专利]一种检测细菌鞭毛的培养方法及应用

说明书

本发明涉及微生物检测技术领域，具体地涉及一种检测细菌鞭毛的培养方法，包括以下步骤：在培养槽内加入融化好的浓度在0.3‑0.5％琼脂培养基，在无菌条件下用接种环在培养槽的一端接种一环菌种，盖好培养槽的密封盖；将接种好细菌的培养槽放于37℃恒温培养箱内培养观察；培养一段时间，观察细菌在接种区域的变化情况，即可判断该细菌是否具有鞭毛。本发明操作简单，非常适合微生物初学者操作，结果观察比较直观；细菌和观察者始终隔离，生物安全程度比较高，非常适合病原细菌鞭毛的检测。

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，具体地涉及一种检测细菌鞭毛的培养方法及应用。

背景技术

在某些菌体上附有细长并呈波状弯曲的丝状物，少则1-2根，多则可达数百根。这些丝状物称为鞭毛，是细菌的运动器官。鞭毛的长度常超过菌体若干倍。细菌的鞭毛自细胞膜长出，游离于细菌细胞外，由远端的鞭毛丝、近端的鞭毛钩和埋置在细胞壁和细胞膜中的基体组成。鞭毛丝，亦称丝状体，位于鞭毛钩以外的远端部分。鞭毛钩，亦称钩形鞘，是连接鞭毛丝和基体之间的部分。基体，又称基粒，连接于鞭毛钩的近端，是鞭毛中最为复杂的结构，保护一条中心杆和与其相连的2～个4环。革兰氏阳性细菌菌的基体由S环、M环构成，革兰氏阴性细菌的基体由L环、P环、S环、M环构成。在大肠杆菌中，L环与细胞壁外膜相连，P环与细胞壁中的肽聚糖层相连，S环位于周质间隙，M环与细胞质膜(有时也称作内膜)相连，这四个环由中心杆连接。

细菌鞭毛的运动方式是旋转运动的。鞭毛丝是半坚硬的“螺旋桨”，由基体带动而推动细菌前进。鞭毛钩比较灵活，相当于鞭毛的“万能关节”。基体起着固定的作用，又是鞭毛运动的关键部件。中心杆相当于“传动杆”，它穿过L环、P环和S环，可以自由转动。这三个环固定在细胞壁和细胞膜上，起着轴承的作用。M环牢固地固定在中心杆的向心末端，而与细胞质膜之间可以自由转动，相当于鞭毛的“发动机”。

细菌鞭毛是自然界最小的旋转纳米马达之一，每分钟旋转高达6万转。为了正常地发挥功能和推进细菌运动，这种鞭毛需要它的所有组分组装在一起来以便进行精确的测量。鞭毛中心杆起着传动轴的作用，将来自位于细胞内部(即细胞质)中的鞭毛“发动机”的力矩传递到细胞外部的鞭毛丝中。这种中心杆自我组装成具有大约25纳米长的结构。

根据鞭毛的数量和部位，可将鞭毛菌分成4类：①单毛菌；②双毛菌；③丛毛菌：菌体一端或两端有一丛鞭毛；④周毛菌：菌体周身遍布鞭毛。

鞭毛是细菌的特殊构造，鞭毛的功能是使细菌具有运动能力。鞭毛的功能包括：①鉴定价值，鞭毛是细菌的运动器官，细菌能否运动可用于鉴定。②致病作用：鞭毛运动能增强细菌对宿主的侵害，因运动往往有化学趋向性，可避开有害环境或向高浓度环境的方向移动。③抗原性：鞭毛具有特殊H抗原，可用于血清学检查。常用的检测细菌鞭毛的方法主要有悬滴法、染色法、半固体培养基穿刺法及滤纸桥培养法(琼脂挖槽法)。

悬滴法：取细菌培养液滴加到凹玻片上，在暗显微镜上观察，适合于非致病性细菌的鞭毛检测。

染色法：取培养好的细菌制成涂片，用鞭毛染色液进行染色，显微镜观察结果，适合于非致病性的细菌鞭毛检测，染色操作比较麻烦，必须使用高倍镜进行观察。

半固体培养基穿刺法：在无菌条件下，取灭菌好的接种针沾取细菌垂直刺入半固体培养基接种针原路返回，如果细菌有鞭毛会沿穿刺线向周围扩散生长，如果没有鞭毛则细菌会沿穿刺线生长；对于初学者来说不容易操作，操作的时候手抖，穿刺出来不是直线，而是来回抖动的，会使结果不容易判断。

滤纸桥培养法(琼脂挖槽法)：将培养基中间挖1cm宽的槽，槽的两侧用无菌滤纸链接，将细菌接种到滤纸条的一侧，放到37℃进行培养，如果滤纸的另一侧有细菌生长则说明细菌有鞭毛。需要一周左右的时间才能观察到结果。

目前并没有一种检测方法适用于微生物实验室的初学者，用来检测非致病性细菌和致病性细菌的方法，特别是对于致病菌尤其是人畜共患的细菌，会对观察者造成潜在的危害。

发明内容