[发明专利]一种用于检测MLL-AF4融合基因的试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于检测MLL‑AF4融合基因的试剂盒，包括MLL‑AF4融合基因扩增检测试剂组，所述MLL‑AF4融合基因扩增检测试剂组包括用于扩增MLL‑AF4融合基因的引物对和检测探针。本发明的试剂盒设计了适用于基于微滴式数字PCR系统的引物和探针，以及相应的对照，使其能够用于基于微滴式数字PCR系统的检测系统。检测流程的自动化程度高，效果好，操作非常简便易上手，适宜临床应用及推广。

技术领域

本发明涉及MLL-AF4融合的检测领域，更特别地，涉及一种用于检测MLL-AF4融合基因的试剂盒。

背景技术

MLL(mixed lineage leukemia)基因异常是急性白血病中一种十分常见的染色体异常，大多数发生MLL基因异常的急性白血病的预后很差，其中由t(4；11)(q21；q23)易位而形成的MLL-AF4融合基因是急性淋巴细胞白血病中第二大常见的染色体异常,多数患者对常规化疗耐药，即使做异基因造血干细胞移植也容易复发，是一个独立的预后不良因素。

当前国内外广泛使用的分子生物学检测MLL-AF4融合基因的方法中，荧光原位杂交技术(FISH)虽然结果较为直观，但只能进行定性检测且操作复杂，需要荧光显微镜等大型仪器设备和病理医生的诊断意见，对检测机构的要求较严格，不利于临床样本的快速检出。传统的固相生物芯片(Biochip)或基因芯片技术存在着可重复性差、灵敏度不够好以及操作繁琐，成本高的突出弱点。焦磷酸测序技术(Pyrosequencing)是新一代DNA序列分析技术，虽具备同时对大量样品进行测序分析的能力，是高通量、低成本、快速、直观地进行核苷酸分析和临床检验的理想的技术平台，但也只适合基因筛查，不适合进行单种融合基因的定量检测。最常用的荧光定量PCR虽能进行单重融合基因的定量实验，但是需要建立标准曲线，成本较高，而且其对微小残留的检测还是比较困难，对于融合比例极低的阳性样本的漏检率很高。

因此，需要一种能够满足临床上最新的诊疗需求，并且操作简便、结果准确、成本低廉和高通量的新型MLL-AF4融合基因检测试剂盒。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供了一种用于检测MLL-AF4融合的试剂盒，包括MLL-AF4融合基因扩增检测试剂组，所述MLL-AF4融合基因扩增检测试剂组包括用于扩增MLL-AF4融合基因的引物对和检测探针。

在一个优选实施方案中，用于扩增MLL-AF4融合基因的引物对的序列如SEQ IDNO:1-4所示，检测MLL-AF4融合基因的探针的序列如SEQ ID NO:5所示。

在一个优选实施方案中，所述MLL-AF4融合基因扩增检测试剂组制成用于检测MLL-AF4融合基因的引物探针预混合液，所述MLL-AF4融合基因的引物探针预混合液中每条引物的浓度为500nM-1000nM，探针的浓度为200nM-400nM。

在一个优选实施方案中，所述试剂盒还包括参考基因扩增检测试剂组，所述参考基因扩增检测试剂组包括用于扩增参考基因的引物对和检测探针。

在一个优选实施方案中，所述参考基因为ABL基因。

在一个优选实施方案中，用于扩增ABL基因的引物对的序列如SEQ ID NO:6和7所示，检测ABL基因的探针的序列如SEQ ID NO:8所示。

在一个优选实施方案中，所述试剂盒还包括阳性对照和/或阴性对照，所述阳性对照为含有不低于500拷贝/μL的MLL-AF4融合基因的溶液，所述阳性对照为不含MLL-AF4融合基因或MLL-AF4融合基因低于10拷贝数/μL的溶液。

在一个优选实施方案中，所述阳性对照和阴性对照中均含有不低于1000拷贝/μL的ABL基因。

在一个优选实施方案中，所述试剂盒还包括反转录酶和DTT。

在一个优选实施方案中，所述试剂盒还包括用于PCR反应的试剂。