[发明专利]用于检测大肠埃希氏菌的核酸试剂、试剂盒及系统

说明书

本公开涉及一种用于检测大肠埃希氏菌的核酸试剂、试剂盒及系统，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1‑24所示的引物和SEQ ID NO.27‑38所示的探针。本公开通过以上所述的引物和探针建立了检测5种易致病的大肠埃希氏菌的核酸试剂、试剂盒及系统，能够实现快速、全面、敏感、特异、自动的检测结果判定，显著提高了对多种大肠埃希氏菌同时进行检测的敏感性、特异性和简便性。

技术领域

本公开涉及大肠埃希氏菌的检测，具体地，涉及一种用于检测大肠埃希氏菌的核酸试剂、试剂盒及系统。

背景技术

大肠埃希氏菌是人类肠道中的正常菌群，但在一定条件下，这些细菌将会引起人类的腹泻病，甚至引起腹泻病的爆发。目前已知的能引起人类致病的大肠埃希氏菌主要包括五种，分别是肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC，又称产志贺毒素大肠埃希氏菌)、肠产毒性大肠埃希氏菌(ETEC)、肠侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)、肠粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)。这些致病性大肠埃希氏菌具有非常重要的病原学意义，把它们与非致病性大肠埃希氏菌、其他肠道致病菌相区分，对于判断疾病预后，分析肠道致病菌病原谱，评估人群肠道疾病负担具有重要的意义。

目前，五种致泻性大肠埃希氏菌主要通过血清分型的方法对致病菌株作出判断，这存在一定的误差，在某些致病型的判断上甚至不到10％。因此，建立快速、敏感、特异的五种致泻性大肠埃希氏菌的检测方法是迫在眉睫的事情，这将客观的诊断致病性大肠埃希氏菌引起的人类腹泻，评估致病性大肠埃希氏菌在人类腹泻病中的病原构成比例，进而对采取积极的预防控制策略提供科学的依据。

发明内容

本公开的目的是提供一种快速、准确、一体化的检测多种大肠埃希氏菌的核酸试剂、试剂盒及系统。

为了实现上述目的，本公开第一方面：提供一种用于检测大肠埃希氏菌的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1-24所示的引物和SEQ ID NO.27-38所示的探针。

可选地，相对于0.5μM的SEQ ID NO.1所示的引物，分别由SEQ ID NO.2-24所示的引物的含量各自为0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM和0.9～1.1μM，分别由SEQ ID NO.27-38所示的探针的含量各自为0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM和0.1～0.3μM。

可选地，所述核酸试剂还包括阳性内质控；所述阳性内质控含有SEQ ID NO.25-26所示的引物、SEQ ID NO.39所示的探针和pET28a质粒。

可选地，SEQ ID NO.27-28所示的探针具有第一荧光标记；SEQ ID NO.29-31,36所示的探针具有第二荧光标记；SEQ ID NO.32-35所示的探针具有第三荧光标记；SEQ IDNO.37-39所示的探针具有第四荧光标记；所述第一荧光标记、所述第二荧光标记、所述第三荧光标记和所述第四荧光标记各不相同，且各自独立地选自FAM荧光标记、JOE荧光标记、HEX荧光标记、VIC荧光标记、TAMRA荧光标记、ROX荧光标记、CY5荧光标记和Quasar670荧光标记中的一种