[发明专利]用于检测大肠埃希氏菌的核酸试剂、试剂盒及系统

权利要求书

1.一种用于检测大肠埃希氏菌的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1-24所示的引物和SEQ ID NO.27-38所示的探针；

其中，所述SEQ ID NO.27-38所示的探针具体如下：

SEQ ID NO.27：ccctttct-FAM-gttact-FAM-gccaa，

SEQ ID NO.28：cact-FAM-gagt-FAM-accaagggcat，

SEQ ID NO.29：ccactat-JOE-gcgacattaaat-JOE-ccag，

SEQ ID NO.30：acaccgat-JOE-gtggt-JOE-cccct，

SEQ ID NO.31：accat-JOE-cctct-JOE-gccggagcta，

SEQ ID NO.32：aatt-CY5-gtctggctatct-CY5-ggttt，

SEQ ID NO.33：actattcat-CY5-gcttt-CY5-caggaccact，

SEQ ID NO.34：ccttt-CY5-caggcagcaagcgt-CY5-cc，

SEQ ID NO.35：aatgcgt-CY5-ttctatggcgt-CY5-gtcggga，

SEQ ID NO.36：ttcccgct-JOE-gctgt-JOE-cgtgatggtt，

SEQ ID NO.37：acccattcct-ROX-ggtat-ROX-gccggtgct，

SEQ ID NO.38：ccat-ROX-gacacgat-ROX-gcgcagact。

2.根据权利要求1所述的核酸试剂，其中，SEQ ID NO.1所示的引物的含量为0.5μM，分别由SEQ ID NO.2-24所示的引物的含量各自为0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM、0.9～1.1μM、0.4～0.6μM和0.9～1.1μM，分别由SEQ IDNO.27-38所示的探针的含量各自为0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM、0.1～0.3μM和0.1～0.3μM。

3.根据权利要求1所述的核酸试剂，其中，所述核酸试剂还包括阳性内质控；所述阳性内质控含有SEQ ID NO.25-26所示的引物、SEQ ID NO.39所示的探针和pET28a质粒；

其中，所述SEQ ID NO.39所示的探针为ctttct-ROX-cgct-ROX-cgacttgcat。

4.一种用于检测大肠埃希氏菌的试剂盒，该试剂盒含有权利要求1～3中任意一项所述的核酸试剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还含有反应体系缓冲液、DNA聚合酶、镁离子、dNTP和水中的至少一种。

6.权利要求1～3中任意一项所述的核酸试剂在制备用于检测大肠埃希氏菌的试剂盒中的用途。

7.根据权利要求6所述的用途，其中，所述大肠埃希氏菌包括肠致病性大肠埃希菌EPEC、肠出血性大肠埃希氏菌EHEC、肠产毒性大肠埃希氏菌ETEC、肠侵袭性大肠埃希氏菌EIEC和肠粘附性大肠埃希氏菌EAEC。

8.一种用于检测大肠埃希氏菌的系统，该系统包括装载有权利要求1～3中任意一项所述的核酸试剂的PCR仪、计算装置和输出装置，所述PCR仪包括第一荧光通道、第二荧光通道、第三荧光通道和第四荧光通道；所述第一荧光通道为FAM荧光通道，所述第二荧光通道为JOE荧光通道，所述第三荧光通道为CY5荧光通道，所述第四荧光为ROX荧光通道；所述计算装置包括存储器和处理器，所述存储器中存储有计算机程序，所述处理器被配置为执行所述存储器中存储的计算机程序，以实现如下的判别：

空白对照和阴阳性对照成立，则检测结果有效；

a)若第一荧光通道有Tm值为61℃或65℃对应的熔解峰曲线且第一荧光通道有Tm值为69℃对应的熔解峰曲线则判定为肠致病性大肠埃希菌EPEC阳性；

b)若第一荧光通道有Tm值为61℃或65℃对应的熔解峰曲线且第二荧光通道有Tm值为58℃和62℃对应的熔解峰曲线则判定为肠出血性大肠埃希氏菌EHEC阳性；

c)若第三荧光通道有Tm值为64.7℃或68.2℃对应的熔解峰曲线则判定为肠侵袭性大肠埃希氏菌EIEC阳性；

d)若第二荧光通道有Tm值为66℃对应的熔解峰曲线且第三荧光通道有Tm值为58℃和61.8℃对应的熔解峰曲线则判定为肠产毒性大肠埃希氏菌ETEC阳性；

e)若第二荧光通道有Tm值为68.9℃对应的熔解峰曲线且第四荧光通道有Tm值为65℃和70℃对应的熔解峰曲线则判定为肠粘附性大肠埃希氏菌EAEC阳性；

f)若第一荧光通道有Tm值为58℃对应的熔解峰曲线或第四荧光通道有Tm值为60℃对应的熔解峰曲线则判定为阳性内质控阳性。