[发明专利]一种母猪繁殖障碍病原检测引物、试剂盒、病原检测方法和应用

权利要求书

1.一种检测母猪繁殖障碍病原的试剂盒，其特征是，包括母猪繁殖障碍病原检测引物，母猪繁殖障碍病原检测引物包括如下引物：

a、检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物对，上游引物为SEQ ID NO.1：5’-CAAATAACAACGGCARRCAG-3’，下游引物为SEQ ID NO.2：5’-GGTCCCTTGCCTCTRGACT-3’，其中R为简并碱基，表示碱基A或G；

b、检测猪伪狂犬病毒的引物对，上游引物为SEQ ID NO.4：5’-CATCACGAACCGCTTCAC-3’，下游引物为SEQ ID NO.5：5’-GGTCACCTTGTGGTTGTTG-3’；

c、检测猪瘟病毒的引物对，上游引物为SEQ ID NO.7：5’-GGAGGGACTAGCCRTAGTG-3’，下游引物为SEQ ID NO.8：5’-ACGTCGAACTACTGACGACTG-3’，其中R为简并碱基，表示碱基A或G；

d、检测猪圆环病毒2型的引物对，上游引物为SEQ ID NO.10：5’-TCCCAGCTGTAGAAGCTCT-3’，下游引物为SEQ ID NO.11：5’-TATGGAAATTCAGGGCATG-3’；

还包括如下探针：

检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的探针，为SEQ ID NO.3：5’-CAGCCAGTCAATCAGCTGTGCCA-3’，

检测猪伪狂犬病毒的探针，为SEQ ID NO.6：5’-CCTTGGAGACGCACTTGCCG-3’，

检测猪瘟病毒的探针，为SEQ ID NO.9：5’-CCTGGGTGGTCTAAGTCCTGAGTA-3’，

检测猪圆环病毒2型的探针，为SEQ ID NO.12：5’-CCAGTTCGTCACCCTTTCCC-3’。

2.如权利要求1所述的检测母猪繁殖障碍病原的试剂盒，其特征是，检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的探针标记有Fam荧光基团，检测猪伪狂犬病毒的探针标记有HEX或VIC荧光基团，检测猪瘟病毒的探针标记有ROX荧光基团，检测猪圆环病毒2型的探针标记有Cy5荧光基团。

3.如权利要求2所述的检测母猪繁殖障碍病原的试剂盒，其特征是，包括含有母猪繁殖障碍病原检测引物和探针的反应液、RNA酶混合液、阳性对照和阴性对照。

4.如权利要求3所述的检测母猪繁殖障碍病原的试剂盒，其特征是，所述反应液包括PCR Buffer和dNTP，各引物的浓度为200-300nM，探针的浓度为100-200nM。

5.如权利要求4所述的检测母猪繁殖障碍病原的试剂盒，其特征是，所述dNTP包括dATP、dUTP、dGTP和dCTP。

6.如权利要求3-5任一项所述的检测母猪繁殖障碍病原的试剂盒，其特征是，RNA酶混合液包括酶稀释液、M-MLV酶、热启动Taq酶与UNG酶，所述M-MLV酶的浓度为5～20U/μL，热启动Taq酶的浓度为1～2U/μL。