[发明专利]一种乙酸和木糖共利用的马克斯克鲁维酵母菌株及筛选方法

说明书

一种乙酸和木糖共利用的马克斯克鲁维酵母菌株菌株，生物保藏编号为:CGMCC No.16757。该菌株由马克斯克鲁维酵母经纤维素水解液长期定向驯化后获得，步骤如下:从YPD平板上挑取酵母单菌落，40℃过夜培养；将收集的细胞重新接种至含有一定浓度纤维素水解液的新鲜培养基中，使其在620nm的光密度值≈0.3；40℃，150rmp/min培养24‑48h，当其OD620≥2.0(5‑7代)时，收集细胞；重复上述步骤，直至在此浓度的抑制物胁迫条件下细胞生长速度明显提高；提高纤维素水解液的浓度，开始新的重复培养；连续驯化后，将收集的细胞涂布于含有纤维素水解液的YPD平板上，40℃培养24‑48h；挑取生长状态较好的单菌落于YPD液体培养基中，40℃，150rmp/min培养24‑48h；将优势抗性克隆保存在30％甘油中。

技术领域

本发明属于工业微生物遗传育种领域，涉及一种乙酸和木糖共利用的马克斯克鲁维酵母菌株和筛选方法。

背景技术

木质纤维素是最为丰富的可再生生物质资源，利用其作为底物进行燃料乙醇生产，可满足我国对能源的需求并且有利于环境保护。以木质纤维素为原料生产燃料乙醇，经济和社会意义重大。纤维素水解液中的抑制物尤其是乙酸对微生物的毒害作用是纤维素乙醇发展面临的主要瓶颈问题之一(Palmqvist,E. Hahn-Hagerdal,B.Fermentation oflignocellulosichydrolysates.I: inhibition and detoxification.Bioresour.Technol.2000，74,17–24)。从目前的文献报道来看，可通过定向进化和过表达某些基因来提高纤维素水解液发酵菌株的乙酸抗性(Piper P,Calderon CO,Hatzixanthis K,MollapourM.Weak acidadaptation:the stress response that confers yeasts with resistanceto organic acid food preservatives.Microbiology,

2001.147:2635–2646；Yingying Chen,Lisa Stabryl,Na Wei.Improved aceticacid resistance in Saccharomyces cerevisiae by overexpression of the WHI2gene identified through inverse metabolic engineering.Appl EnvironMicrobiol.2016,82(7):2156-2166.)。而如果发酵菌株具有乙酸的利用特性，则可以进一步提高纤维素乙醇生产效率。(Na Wei,Josh Quarterman,Soo Rin Kim,Jamie H.D.CateYong-Su Jin.Enhanced biofuel production through coupledacetic acid and xyloseconsumption by engineeredyeast。Nature communications,2013,4:2580-2588)。