[发明专利]一种普利卡那肽的固相片段合成方法

说明书

本发明公开了一种普利卡那肽的固相片段合成方法，首先采用固相合成方法在固相树脂载体上并有缩合试剂的条件下由碳端向氮端逐一偶联保护氨基酸，合成得到八肽片段和八肽树脂，然后固相缩合得到十六肽树脂，根据十六肽树脂中R保护基特性选择R保护基的脱除与树脂裂解的同步或先后顺序，进行R保护基的脱除与树脂裂解；最后再依次定向环合两对二硫键，最终形成普利卡那肽粗肽，再经制备液相纯化、冻干得到高纯度普利卡那肽。本发明方法大大缩短了合成周期、避免了传统固相逐一偶联效率低的方法，也避开了步骤复杂、繁琐的液相方法，大大降低成本，其纯度高，副产物少，定向稳定、准确，有利于产品的纯化，产物收率高，便于大生产化操作。

技术领域

本发明属于多肽类药物制备技术领域，尤其涉及一种普利卡那肽的固相片段合成方法。

背景技术

普利卡那肽，英文名：plecanatide，其结构如下：

普利卡那肽(plecanatide)是尿鸟苷蛋白(uroguanylin)的类似物，含有十六个氨基酸的环状多肽，具有促尿钠排泄的鸟苷酸环化酶受体激动药的作用，能调节胃肠道中的酸碱离子，诱导液体转运进入胃肠道，增加胃肠道的蠕动，适用于治疗成人慢性特发性便秘。美国食品药品管理局(FDA)于2017年1月19日批准上市，商品名为Trulance。

目前普利卡那肽的化学合成方法如下：

1)通过固相逐一偶联成十六全肽树脂再定向成环，如深圳翰宇CN103694320B、南京工业大学CN104628827A。其缺陷，周期长，偶联效率低。

2)固相逐一偶联得到十六全肽树脂后，采用空气无序环化两对二硫键。如苏州科技大学CN107383170A。其缺陷，无序环化收率低、准确性差、杂质多且反应周期长。

3)固相逐一偶联得到十六全肽树脂后，环化通过定向环化，四个Cys位置采用三个或四个不同保护基保护巯基，定向环化时要逐个去除保护基再进行固环。如苏州科技大学CN107383171A。其缺陷，半胱氨酸采用三或四个不同保护基保护使得工艺繁琐，引入杂质多且不利于产业化。

4)固液结合法：通过片段6+8+2得到普利卡那肽全肽，液相合成6肽，固相合成得到8肽和2肽，再对接环化而成普利卡那肽。如WO2012/118972A2、CN108003222A。其缺陷，6片段肽液相合成强度大，三段片段肽的合成并对接使合成周期加长。

发明内容

本发明的目的是提供一种普利卡那肽的固相片段合成方法，用以克服普利卡那肽固相逐一偶联过程中遇到偶联困难、疏水性强且偶联效率低的缺陷。

为了实现上述目的，本发明技术方案如下：

一种普利卡那肽的固相片段合成方法，所述普利卡那肽的固相片段合成方法，包括：

采用八肽片段：

R-Asn(R1)-Asp(R2)-Glu(R3)-Cys(R4)-Glu(R3)-Leu-Cys(R5)-Val-OH；

与八肽树脂：

NH₂-Asn(R1)-Val-Ala-Cys(R4)-Thr(R6)-Gly-Cys(R5)-Leu-树脂；

在缩合剂的存在下固相缩合得到十六肽树脂：

R-Asn(R1)-Asp(R2)-Glu(R3)-Cys(R4)-Glu(R3)-Leu-Cys(R5)-Val-Asn(R1)-Val-Ala-Cys(R4)-Thr(R6)-Gly-Cys(R5)-Leu-树脂；

根据十六肽树脂中R保护基特性选择R保护基的脱除与树脂裂解的同步或先后顺序，进行R保护基的脱除与树脂裂解；