[发明专利]一种普利卡那肽的固相片段合成方法

权利要求书

1.一种普利卡那肽的固相片段合成方法，其特征在于：所述普利卡那肽的固相片段合成方法，包括：

采用八肽片段：

R-Asn(R1)-Asp(R2)-Glu(R3)-Cys(R4)-Glu(R3)-Leu-Cys(R5)-Val-OH；

与八肽树脂：

NH₂-Asn(R1)-Val-Ala-Cys(R4)-Thr(R6)-Gly-Cys(R5)-Leu-树脂；

在缩合剂的存在下固相缩合得到十六肽树脂：

R-Asn(R1)-Asp(R2)-Glu(R3)-Cys(R4)-Glu(R3)-Leu-Cys(R5)-Val-Asn(R1)-Val-Ala-Cys(R4)-Thr(R6)-Gly-Cys(R5)-Leu-树脂；

根据十六肽树脂中R保护基特性选择R保护基的脱除与树脂裂解的同步或先后顺序，进行R保护基的脱除与树脂裂解；

再依次定向环合两对二硫键，最终形成普利卡那肽粗肽，再经制备液相纯化、冻干得到高纯度普利卡那肽；

其中：

R选自Boc、Fmoc、Z中任意一个；

R1选自Trt、Mtt中任意一个；

R2选自tBu、OtBu、OAll中任意一个；

R3选自OtBu、OAll、OBzl中任意一个；

R4、R5选自Trt、Acm、StBu、Alloc中任意不同的一个；

R6选自tBu、Bzl中任意一个。

2.如权利要求1所述的普利卡那肽的固相片段合成方法，其特征在于：所述八肽片段由以下步骤合成：

采用固相合成方法，在固相树脂载体上并有缩合试剂的条件下由碳端向氮端逐一偶联保护氨基酸：Fmoc-Val-OH、Fmoc-Cys(R5)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Glu(R3)-OH、Fmoc-Cys(R4)-OH、Fmoc-Glu(R3)-OH、Fmoc-Asp(R2)-OH、R-Asn(R1)-OH，得到：

R-Asn(R1)-Asp(R2)-Glu(R3)-Cys(R4)-Glu(R3)-Leu-Cys(R5)-Val-树脂；

经裂解试剂脱除树脂，将反应液加入醚类溶剂中沉降得到八肽片段；

所述裂解试剂为1％-50％的TFE/二氯甲烷溶液，反应时间为20分钟-2.0小时；温度为10-30℃，醚类溶剂为乙醚、异丙醚、甲基叔丁基醚中任意一种，所述醚类溶剂的用量为4-6体积倍量。

3.如权利要求1所述的普利卡那肽的固相片段合成方法，其特征在于：所述八肽树脂由以下步骤合成：

采用固相合成方法，在固相树脂载体上并有缩合试剂的条件下由碳端向氮端逐一偶联保护氨基酸：Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Cys(R5)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Thr(R6)-OH、Fmoc-Cys(R4)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asn(R1)-OH，再脱除Fmoc保护基，得到NH₂-Asn(R1)-Val-Ala-Cys(R4)-Thr(R6)-Gly-Cys(R5)-Leu-树脂。

4.如权利要求1所述的普利卡那肽的固相片段合成方法，其特征在于：所述的普利卡那肽序列中四个Cys侧链保护基团R4、R5保护基优选为Trt、ACM。

5.如权利要求1所述的普利卡那肽的固相片段合成方法，其特征在于：所述十六肽树脂，R保护基为Boc时，R保护基的脱除在树脂裂解反应中同步脱除；R保护基为Fmoc时，先脱除R保护基，再进行树脂裂解反应。