[发明专利]一种基于液体发酵的冬虫夏草多糖提取纯化工艺

权利要求书

1.一种基于液体发酵的冬虫夏草多糖提取纯化工艺，其特征在于：包括如下步骤：

A、将冬虫夏草菌接种到冬虫夏草种子培养基上，放进摇床培养箱，培养3-4d，得到种子液；

B、将步骤A得到的种子液，接种到经灭菌处理的冬虫夏草液体培养基上，接种量为6-9％，放进恒温恒湿培养箱中，在28.5℃温度条件下，发酵5-8天，得到冬虫夏草菌丝体发酵液；

C、将步骤B得到的冬虫夏草菌丝体发酵液放入破壁机中，加入2-4倍质量的蒸馏水，粉碎8-15min，得到冬虫夏草混合液；

D、将步骤C得到的冬虫夏草混合液，超声波处理40-50min，在70-75℃下回流提取4-5h，提取液过滤后浓缩，得到多糖浓缩液；

E、在步骤D得到的多糖浓缩液中加入3-4.5倍体积的无水乙醇，搅拌后冷却至4℃，静置18-30小时，进行离心处理，并将沉淀烘干得到冬虫夏草多糖提取物；

F、用蒸馏水充分淋洗AB-8型大孔吸附树脂和D-280型大孔吸附树脂大孔吸附树脂，用含氨质量分数为8-14g/kg的乙醇溶液浸泡2-3h，去掉树脂表面和孔道内残留的溶剂和活性树脂，用去离子水洗至中性，无醇味，采用湿法装柱，将树脂慢慢装入直径10cm的玻璃柱中，树脂高约150cm；将步骤E得到的冬虫夏草多糖提取物加蒸馏水溶解，上AB-8型大孔吸附树脂柱，进行反复洗脱，并收集洗脱液；

G、将步骤F得到的洗脱液，上D-280大孔吸附树脂柱，进行脱色，脱色后，真空浓缩，真空干燥，得到冬虫夏草多糖；

其中，步骤A中每kg所述冬虫夏草种子培养基的组成为：葡糖糖25-35g、酵母膏1.8-2.2g、土豆粉185-195g、蚕蛹粉12-15g、酸水解酪蛋白1.2-1.4g、磷酸二氢钾1.5-1.8g、硫酸镁0.9-1.2g、其余为蒸馏水；

步骤B中每kg所述冬虫夏草液体培养基的组成为：玉米粉20-25g、小米粉9-12g、土豆粉7-9g、葡糖糖38-48g、磷酸二氢钾2.1-3.5g、酸水解酪蛋白2.8-3.5g、硫酸镁0.9-1.3g、其余为蒸馏水。

2.根据权利要求1所述的基于液体发酵的冬虫夏草多糖提取纯化工艺，其特征在于：步骤A中所述冬虫夏草菌为中国科学院微生物研究所的蝙蝠蛾拟青霉或蝙蝠蛾被毛孢。

3.根据权利要求1所述的基于液体发酵的冬虫夏草多糖提取纯化工艺，其特征在于：步骤B中每kg所述冬虫夏草液体培养基中还包含1-2片复合维生素B。

4.根据权利要求1所述的基于液体发酵的冬虫夏草多糖提取纯化工艺，其特征在于：步骤A中每kg所述冬虫夏草种子培养基的组成为：葡糖糖32.5g、酵母膏1.95g、土豆粉190g、蚕蛹粉13.5g、酸水解酪蛋白1.3g、磷酸二氢钾1.7g、硫酸镁1.1g、其余为蒸馏水。

5.根据权利要求1所述的基于液体发酵的冬虫夏草多糖提取纯化工艺，其特征在于：步骤B中每kg所述冬虫夏草液体培养基的组成为：玉米粉22g、小米粉10g、土豆粉8.5g、葡糖糖45.5g、磷酸二氢钾2.9g、酸水解酪蛋白3.3g、硫酸镁1.2g、其余为蒸馏水。

6.根据权利要求1所述的基于液体发酵的冬虫夏草多糖提取纯化工艺，其特征在于：步骤A中所述摇床培养箱的培养条件控制为115-130r/min的转速、28.5℃的环境温度。

7.根据权利要求1所述的基于液体发酵的冬虫夏草多糖提取纯化工艺，其特征在于：步骤D中所述的浓缩是在60℃下浓缩。

8.根据权利要求1所述的基于液体发酵的冬虫夏草多糖提取纯化工艺，其特征在于：步骤G中所述的真空浓缩是在45℃下真空浓缩。

9.根据权利要求1所述的基于液体发酵的冬虫夏草多糖提取纯化工艺，其特征在于：步骤E中所述的离心是6000r/min离心10min。