[发明专利]一种抗VEGF的单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明属于生物医药抗体领域，更具体地，本发明公开了一种抗VEGF的单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明的抗VEGF单克隆抗体具有良好的生物活性，能够有效结合VEGF蛋白，并能够在蛋白水平和细胞水平有效封闭VEGF蛋白与其受体相结合。该单克隆抗体能够单独或与其它抗肿瘤药物联合应用在肿瘤免疫治疗以及肿瘤的诊断和筛查中，具有制备治疗肿瘤、抗自身免疫性疾病等药物的良好前景。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种抗VEGF的单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

肿瘤的生成和发展与新血管生成有密切的联系，通常肿瘤开始于单个异常细胞，由于与可利用毛细管床的距离非常接近，而且能在较长的一段时间里保持休眠状态。有些肿瘤细胞可能转向血管发生表型以激活内皮细胞，所述内皮细胞增殖并成熟成新的毛细血管。这些新形成的血管不仅促进原发性肿瘤继续生长，而且使转移性肿瘤细胞传播并重新建群。实体瘤与正常细胞相比，新血管形成让肿瘤细胞获得了与正常细胞相比的生长优势。在乳腺癌及一些其它肿瘤中，在肿瘤组织切片中观察到微脉管密度与患者存活之间存在一定的相关性(Weidner et al, N. Eng1. Med. 324 (1991) 1-8:Horak et al, Lancet340(1992)1120-1124和Macchiarini,等,Lancet340(1992)145-146) 。虽然尚未完全了解控制新血管发生的精确机制，但是肿瘤相关新血管的形成源自众多血管发生刺激物与抑制物的净平衡，参见Folkman，NatMed(1)：27-31(1995)。除肿瘤之外，新血管的发生和生成有可能与多种疾病的发生机制相关，例如：眼内新血管综合征，增殖性视网膜病或年龄相关的黄斑变性(AMD) 、类风湿性关节炎和银屑病Folkman,etal,Bio1.Chem267(1992)10931-10934；Klagsbrun,et al ,Annu. Rev.Physio1. 53 (1991) 217-239等。

血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，VEGF与内皮细胞膜上其受体，血管内皮细胞生长因子受体（Vascular Endothelial Growth Factor Receptor）结合，引起受体的自身磷酸化，从而激活有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK），实现有丝分裂原特性，诱导内皮细胞增生。VEGF是最好表征的和最强力的血管发生正调节物之一， Ferrara, N.;Kerbel，R.S Nature438：967-74(2005)。C除了在血管发生和血管生成(vasculogenesis)中起到发生因子作用之外，VEGF作为多效性生长因子，还展现了在其它生理学过程中的多种生物学效应，诸如调节内皮细胞存活、血管通透性和血管舒张、单核细胞趋化性和钙流入等功能，Ferraraand etal., EndocrineRev.18：4-25(1997)。还有研究报导了VEGF对数种非内皮细胞类型，诸如视网膜色素上皮细胞、胰管细胞和施旺细胞的促有丝分裂效果，Sondell et al.,J.Neurosci.19:5731-5740(1999)。

VEGF作为病理学状况中血管发生的主要调节物，使其成为了一种非常有价值的药物靶点，针对该靶点进行了大量的工作。但是，以VEGF为靶点进行治疗时，会引起涉及多种细胞因子的情况发生。例如，炎性细胞可通过分泌炎性细胞因子参与血管发生，所述炎性细胞因子可影响内皮细胞活化、增殖、迁移和存活，相关综述见Albini，A.，Tosetti，F.，Benelli，R. Noonan，D.M.。与靶向VEGF和成纤维细胞生长因子信号传导的化合物的组合治疗中，不仅提高了抗肿瘤效力且延迟了晚期阶段肿瘤中抗药性的产生。有研究表明，肿瘤浸润性基质成纤维细胞，可以成为促血管发生因子的来源之一Dong，J.etal. EmboJ23：2800-10(2004)等。