[发明专利]用于检测和/或辅助检测致手足口病毒EV71的引物组、试剂和试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体而言，提供了一种用于检测和/或辅助检测致手足口病毒EV71的引物组、试剂和试剂盒及检测方法。本发明针对致手足口病毒EV71的保守序列，设计特异性RPA扩增引物组，引物组包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，同时基于该引物组建立了致手足口病毒EV71的检测方法，可对致手足口病毒EV71进行定性检测。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种用于检测和/或辅助检测致手足口病毒EV71的引物组、试剂和试剂盒及检测方法。

背景技术

手足口病常见于学龄前儿童，婴幼儿多见，该病可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹、溃疡，一般预后良好，但也有出现心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜炎等并发症。手足口病是由肠道病毒引起的传染病，肠道病毒共有20多种，其中，柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16，CVA16)与肠道病毒71型(enterovirus type 71，EV71)均为手足口病的主要致病原。EV71所致的手足口病通常症状更典型、并发症的发生率和致死率均较高。由于不同型病毒所导致的手足口病的治疗方式不同，及时准确区分不同型致病病毒对患儿的治疗尤为重要。

目前对于致手足口病毒的检测有各种不同的方法，但是，都有各自的缺点。细胞病变效应检测法实验周期太长且灵敏度低。免疫荧光法和Western blot法对于病毒感染量有一定要求，较低的感染量无法检测病毒。实时荧光聚合酶链反应(realtime polymerasechain reaction，Real-Time PCR)、一步法RT-PCR、巢式PCR法均为基于传统PCR的方法，需要变性、退火、延伸三个步骤，每个步骤的温度不一样，需要专门的热循环仪来进行，限制了其使用范围。因此，开发一种简便、快捷、成本低并且适用范围广的检测方法具有重要意义。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种用于检测和/或辅助检测致手足口病毒EV71的引物组，本发明的第二目的在于提供上述引物组在制备检测和或辅助检测致手足口病毒EV71的产品中的应用，本发明的第三目的在于提供一种试剂，本发明的第四目的在于提供一种试剂盒，本发明的第五目的在于提供一种致手足口病毒EV71的检测方法，以缓解现有技术中缺少一种可以快速、简便、准确检测EV71的方法的技术问题。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种用于检测和/或辅助检测致手足口病毒EV71的引物组，所述引物组包括SEQID NO.1所示的核苷酸序列和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

上述引物组在制备检测和或辅助检测致手足口病毒EV71的产品中的应用。

进一步地，所述产品包括试剂或试剂盒。

一种试剂，包括上述引物组。

进一步地，所述试剂包括阳性对照样品；

优选地，所述阳性对照样品为含有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的DNA质粒。

进一步地，所述引物组中SEQ ID NO.1所示核苷酸序列和SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的终浓度均独立的为0.38-0.58μmol/L；

优选地，所述阳性对照样品的终浓度为0.1-0.3ng/μL。

一种试剂盒，包括上述引物组。

进一步地，所述试剂盒包括阳性对照样品；

优选地，所述阳性对照样品为含有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的DNA质粒；