[发明专利]一种马里兰烟叶发酵提取物的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种马里兰烟叶发酵提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)原料前处理：马里兰烟叶经粉碎机粉碎至40目～100目粉末；

(2)微生物菌株的活化：将扣囊复膜孢酵母Saccharomycopsis fibuligera和桑肠杆菌Enterobacter mori VL4-3的活性固体冻干菌粉，加入到10～20倍质量的灭菌处理的质量浓度为5～20％葡萄糖溶液中，置于38～50℃水浴锅活化30～60min，得到微生物菌株活化液，其中所述的桑肠杆菌Enterobacter moriVL4-3保藏号为CCTCC NO：M2012020，于2012年2月16日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心；

(3)固定化载体制备：将马里兰烟的烟杆洗净烘干后处理成碎块，高压灭菌后烘干；

(4)微生物菌株的固定化处理：称取上述步骤(3)灭菌烘干后的马里兰烟杆碎块装入容器，按照碎块与活化液质量比为1:5～30加入已培养活化好的微生物菌株活化液，放置于4±0.5℃冷藏柜固定12～30h，过滤得到固定化微生物菌株的烟杆碎块；

(5)马里兰烟叶的固定化发酵：将步骤(1)所得马里兰烟叶粉末与15～30倍质量的水混合均匀，加入步骤(4)所述固定化微生物菌株的烟杆碎块，固定化微生物菌株的烟杆碎块与马里兰烟叶粉末质量比为1:0.5～2，在温度为40～55℃，匀速搅拌，添加乙二酸调节pH值为4.5～6.5，发酵1～5d，筛网过滤去除烟杆碎块，微孔过滤除去马里兰烟粉残渣，保留马里兰烟叶发酵液A；

(6)连续逆流超声提取：将步骤(5)所得马里兰烟粉残渣按速率0.1～0.8kg/10min投料至浸出舱，开启主机和超声波发生器，调节温度60～100℃，料液比为质量比1:2～6，从浸出舱低端运行0.2～1h后调节出液阀门均匀放液，控制溶剂加入流量，保持浸出仓液位平衡，连续逆流超声提取达30～60min时，投料加入占马里兰烟粉质量0.1～1％的中性醋酸铝，当连续逆流超声提取共达50～150min时，停止生产工艺，排渣，得到浸出液B；

(7)将步骤(5)的发酵液A和步骤(6)的浸出液B合并，得到马里兰烟发酵提取液。

2.如权利要求1所述的马里兰烟叶发酵提取物的制备方法，其特征在于：还包括步骤(8)：将所述马里兰烟发酵提取液经真空冷冻干燥得到马里兰烟发酵提取物。

3.如权利要求1所述的马里兰烟叶发酵提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的活性固体冻干菌粉为食品级，活性为10～20u/mg。

4.如权利要求1所述的马里兰烟叶发酵提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中的马里兰烟的烟杆用剪刀剪成1cm长的小块。

5.如权利要求1所述的马里兰烟叶发酵提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中匀速搅拌的转速为20～100rpm。

6.如权利要求1所述的马里兰烟叶发酵提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(6)中使用的中性醋酸铝为分析纯。

7.一种如权利要求1所述方法制备的马里兰烟叶发酵提取液在传统卷烟配方烟丝加料中的应用，将马里兰烟叶发酵提取液和糖分、水混匀喷洒到制丝加料罐中，在40～60℃与传统卷烟配方烟叶不停搅拌混匀，按正常卷烟工艺加工成配方烟丝，其中马里兰烟叶发酵提取液与烟丝质量比为0.01％或0.05％。

8.一种如权利要求1所述方法制备的马里兰烟叶发酵提取液在传统烟草配方烟叶中的应用，在制丝车间加料工艺中，将马里兰烟发酵提取液和复合氨基酸与水、糖料混合均匀，喷洒到加料罐的烟叶上，经后续制丝工序加工成成品配方烟丝，其中马里兰烟发酵提取液与烟丝质量比为0.01％或0.05％，复合氨基酸与马里兰烟发酵提取液的质量比为0.1％，复合氨基酸由苯丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸按照1:0.6:1.2质量比混合而成。

9.一种如权利要求2所述方法制备的马里兰烟叶发酵提取物在新型加热不燃烧卷烟烟丝中加香的应用，将所述马里兰烟叶发酵提取物溶解于70％乙醇溶液中，稀释1000倍，按与烟丝0.01％的质量比加入烟丝中。