[发明专利]重组Martentoxin的制备、表征及应用有效
| 申请号： | 201811308401.8 | 申请日： | 2018-11-05 |
| 公开（公告）号： | CN109384852B | 公开（公告）日： | 2021-09-03 |
| 发明（设计）人： | 曹春阳;刘新莲;陶杰;吉永华;蓝文贤 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海有机化学研究所 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N1/21;C12P21/06;C12Q1/02;G01N27/26;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 徐迅;崔佳佳 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 martentoxin 制备 表征 应用 | ||
1.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞中含有一载体，所述载体为pETDuet-1载体，并且含有编码一融合蛋白的核苷酸序列，所述的融合蛋白从N端到C端具有式I所示结构：
P1-P2-P3-P4 (式I)
式中，
P1为纯化标签元件，所述P1为6×His序列；
P2为麦芽糖结合蛋白元件MBP，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；
P3为蛋白酶识别位点元件，所述蛋白酶为Thrombin酶；
P4为MarTX多肽元件，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
“-”表示连接上述元件的肽键；
并且，所述的宿主细胞是E.coliOrigamiB(DE3)。
2.如权利要求1所述的宿主细胞，其特征在于，编码所述元件P2的核苷酸序列为SEQ IDNO:3。
3.如权利要求1所述的宿主细胞，其特征在于，编码所述元件P4的核苷酸序列为SEQ IDNO:1。
4.一种产生融合蛋白的方法，其特征在于，包括步骤：
在适合表达的条件下，培养权利要求1所述的宿主细胞，从而表达出所述的融合蛋白，其中，所述的融合蛋白从N端到C端具有式I所示结构：
P1-P2-P3-P4 (式I)
式中，
P1为纯化标签元件，所述P1为6×His序列；
P2为麦芽糖结合蛋白元件MBP，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；
P3为蛋白酶识别位点元件，所述蛋白酶为Thrombin酶；
P4为MarTX多肽元件，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
“-”表示连接上述元件的肽键。
5.一种制备MarTX多肽的方法，其特征在于，包括步骤：
(i)用权利要求4所述的方法获得所述的融合蛋白；
(ii)用Thrombin蛋白酶对所述的融合蛋白酶切，从而获得酶切产物，该酶切产物对应于MarTX多肽；和
(iii)从酶切产物中分离或纯化出所述的MarTX多肽。
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