[发明专利]一种制备人参稀有皂苷Rk3

权利要求书

1.一种制备人参稀有皂苷Rk₃的方法，其特征在于，在菌种培养基中接种冬虫夏草菌种，150 r/min、26±1 ℃、湿度60±1%恒温振荡培养至种子液浑浊黏稠呈淡黄色，获得冬虫夏草种子液，然后接种至灭菌后的原人参药材上培养至长满菌丝，将长满菌丝的原人参药材取出，干燥，获得含有人参稀有皂苷Rk₃的初级产物，分离纯化初级产物获得人参稀有皂苷Rk₃；

所述种子液与原人参药材的体积质量比为（0.8-1）mL：1g；所述培养的温度为24-26℃；

所述原人参药材在接种冬虫夏草菌种前进行前处理：取原人参药材，烘干，粉碎，加水至原人参药材初始含水量为50-70%。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述菌种培养基配方为：

葡萄糖1.9-2.1%，KH₂PO₄ 0.09-0.11%，MgSO₄ 0.09-0.11%，蛋白胨0.45-0.55%，酵母粉0.18-0.22%，维生素B₁ 0.09-0.11%，pH自然。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述分离纯化初级产物为：

将初级产物用乙醇加热回流提取，回收溶剂并挥干至无醇味后用水混悬，再依次经石油醚、乙酸乙酯顺序萃取，保留乙酸乙酯层，回收溶剂，得乙酸乙酯层浸膏；

取乙酸乙酯层浸膏加入甲醇使其溶解，然后与硅胶拌匀并烘干，利用硅胶色谱柱用梯度浓度的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，洗脱液经检识得到富含人参皂苷Rk₃的部分；

再将富含人参皂苷Rk₃的部分通过开放式ODS柱用梯度浓度甲醇进行梯度洗脱，洗脱液经检识再次得到富含人参皂苷Rk₃的部分，将此部分通过半制备液相，制备得到高纯度人参皂苷Rk₃单体化合物。

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述加入甲醇溶解的乙酸乙酯层浸膏与硅胶的体积比为1:1。

5.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述梯度浓度的二氯甲烷-甲醇包括体积比为100:0的二氯甲烷-甲醇、100:2的二氯甲烷-甲醇、100:5的二氯甲烷-甲醇、100:10的二氯甲烷-甲醇、100:20的二氯甲烷-甲醇和100:50的二氯甲烷-甲醇。

6.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述梯度浓度甲醇包括纯水、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇和纯甲醇。