[发明专利]一种CRISPR单碱基修复系统及其应用在审
| 申请号： | 201811284549.2 | 申请日： | 2018-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN109517845A | 公开（公告）日： | 2019-03-26 |
| 发明（设计）人： | 胡争;周灿权;樊惟文;麦庆云 | 申请（专利权）人： | 中山大学附属第一医院 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/85;C12N15/10;A61K48/00;A61P7/06 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 颜希文;罗尧 |
| 地址： | 510080 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 单碱基 修复系统 碱基 单链寡核苷酸 地中海贫血 碱基序列 点突变 修复 供体 突变 基因突变位点 真核表达载体 细胞 表达质粒 定向改造 临床应用 单基因 野生型 基因 无痕 转染 制备 治疗 应用 诱导 疾病 | ||
1.一种CRISPR单碱基修复系统，其特征在于，包括能表达sgRNA和Cas9的真核表达载体，以及作为供体模板的单链寡核苷酸，其中，
所述单链寡核苷酸的碱基序列与以需要修复的单碱基两侧第30～60个碱基之间的碱基序列基本一致，区别在于，在所述供体模板上，与需要修复的单碱基相应的碱基为未突变野生型的碱基，以及需要修复的单碱基的一侧发生了无义突变。
2.根据权利要求1所述的修复系统，其特征在于，所述单链寡核苷酸的两端至少有1个碱基具有硫代修饰。
3.根据权利要求2所述的修复系统，其特征在于，所述单链寡核苷酸的两端有2个碱基具有硫代修饰。
4.根据权利要求1所述的修复系统，其特征在于，所述单链寡核苷酸的长度为70～100bp。
5.根据权利要求1所述的修复系统，其特征在于，所述需要修复的单碱基为致病突变β珠蛋白基因的CD17A→T中的碱基T。
6.根据权利要求5所述的修复系统，其特征在于，编码所述sgRNA的碱基序列如SEQ IDNO.1或SEQ ID NO.2所示，所述单链寡核苷酸的碱基序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示。
7.根据权利要求5所述的修复系统，其特征在于，所述真核表达载体为PX330。
8.权利要求1～7任一项所述的修复系统在制备治疗β珠蛋白基因CD17A→T点突变导致的β地中海贫血病的药物中的应用。
9.一种治疗β珠蛋白基因CD17A→T点突变导致的β地中海贫血病的药物，其特征在于，所述药物中含有如权利要求5～7任一项所述的修复系统。
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