[发明专利]一种醇脱氢酶突变体及其在辅酶再生中的应用在审
| 申请号： | 201811277370.4 | 申请日： | 2018-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN109402076A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 倪晔;朱诚;许国超;周婕妤 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/22;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 醇脱氢酶 突变体 野生型 底物 辅酶再生 丁二醇 醇类 生物工程技术领域 氨基酸序列 辅酶NADPH 催化效率 工业应用 己二醇 酪氨酸 酶工程 戊二醇 缬氨酸 催化 突变 应用 再生 | ||
1.一种醇脱氢酶的突变体，其特征在于，所述突变体是通过将出发氨基酸序列如SEQID No.1所示的醇脱氢酶的第84位缬氨酸和/或第127位酪氨酸进行突变得到的。
2.如权利要求1所述的一种醇脱氢酶的突变体，其特征在于，所述突变体为M1、M2、M3、M4或M5；
所述M1是通过将出发氨基酸序列如SEQ ID No.1所示醇脱氢酶的第84位缬氨酸突变为异亮氨酸得到的；
所述M2是通过将出发氨基酸序列如SEQ ID No.1所示醇脱氢酶的第127位酪氨酸突变为半胱氨酸得到的；
所述M3是通过将出发氨基酸序列如SEQ ID No.1所示醇脱氢酶的第127位酪氨酸突变为甲硫氨酸得到的；
所述M4是通过将出发氨基酸序列如SEQ ID No.1所示醇脱氢酶的第84位缬氨酸突变为异亮氨酸以及第127位酪氨酸突变为半胱氨酸得到的；
所述M5是通过将出发氨基酸序列如SEQ ID No.1所示醇脱氢酶的第84位缬氨酸突变为异亮氨酸以及第127位酪氨酸突变为甲硫氨酸得到的。
3.如权利要求1或2所述的一种醇脱氢酶的突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列为SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5或SEQ ID No.6。
4.编码权利要求1-3任一所述突变体的基因。
5.携带权利要求4所述基因的重组质粒。
6.如权利要求5所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒载体为pET载体。
7.携带权利要求4所述基因或权利要求5或6所述重组质粒的宿主细胞。
8.权利要求1-3任一所述的突变体或权利要求4所述的基因或权利要求5或6所述的重组质粒或权利要求7所述的宿主细胞在辅酶再生方面的应用。
9.一种生产醇脱氢酶突变体的方法，其特征在于，所述方法为先将权利要求7所述宿主细胞接种至LB培养基中，于30～40℃、100～200r·min-1摇床培养至培养液中吸光度OD600达到0.5～1.0，然后在培养液中加入异丙基-β-D-六代呋喃半乳糖苷(IPTG)于16～30℃下进行诱导5～10h，得到醇脱氢酶突变体。
10.一种生产D-苯丙氨酸钠的方法，其特征在于，所述方法为以苯丙酮酸钠和氨基酸脱氢酶DAADHD94A和NADP+以及(NH4)2SO4或NH4Cl或CH3COONH4中的一种作为反应体系，以权利要求1-3任一所述醇脱氢酶突变体以及1,4-丁二醇或1,5-戊二醇或1,6-己二醇或异丙醇或2,3-丁二醇中的一种作为辅酶循环系统，以缓冲液作为缓冲体系，于30～35℃、pH 7～9的条件下不对称还原反应1～24h，得到D-苯丙氨酸钠。
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