[发明专利]一种人类肤质快速检测组合引物及其应用

权利要求书

1.一种人类肤质快速检测组合引物，其特征在于：所述组合引物包括皮肤美白相关基因位点：IRF4基因上的rs12203592位点、HREC2基因上的rs12913832位点、SLC45A2基因上的rs16891982位点，皮肤保湿相关基因位点：ST14基因上的rs137852931位点、FLG基因上的rs11103631位点、AQP3基因上的rs17553719位点，皮肤弹性相关基因位点：MMP1基因上的rs1799750位点、MMP3基因上的rs3025058位点、ELN基因上的rs7787362位点，皮肤敏感性相关基因位点：TLR1基因上的rs5743611位点、TLR2基因上的rs5743704位点、TLR6基因上的rs5743810位点；所述组合引物包含了所有所选位点的正向引物和反向引物，如IRF4基因的rs12203592位点的引物包含了正向引物序列SEQ ID NO:1和反向引物序列SEQ ID NO:2，其它位点的引物序列详见引物序列详情表。

2.权利要求1所述的组合引物在制备人类肤质快速检测试剂盒中的应用。

3.如权利要求2所述的人类肤质快速检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1所述的组合引物和一组包含饱和染料的PCR反应mix，所述组合引物的序列如SEQ IDNO:1-24所示。

4.权利要求3所述的试剂盒在人类肤质快速检测方法中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：包括以下步骤：

1)样品采集、DNA提取和PCR扩增引物的设计：所述扩增引物设计为权利要求1所述的组合引物；

2)高分辨率溶解荧光定量PCR扩增上述组合引物：将步骤1)中不同的组合引物按照等比例混合，混合后作为一个的引物池，按照试剂盒要求配置反应体系，体系如下：

用此引物按照荧光定量PCR的方法进行扩增，扩增条件如下：95℃预变性10min；然后按95℃变性10s，65-55℃退火10s，每个循环下降0.5℃，72℃延伸30s的程序进行45个循环；扩增出的DNA片段即为扩增文库；

3)步骤2)中的DNA片段按照高分辨率熔解曲线法进行高分辨率溶解曲线过程，扩增产物的熔解步骤在PCR循环结束后立即进行，程序为：升温至95℃1min，然后降温至40℃1min，再升温至65℃1s。从65℃连续升温到95℃的过程中进行荧光收集，25次/℃，最后，降温至40℃。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述组合引物为12对组合引物，上游组合引物与下游组合引物之间的退火温度在3度内，且引物对与引物对之间形成的引物二聚体的△G的绝对值小于5。