[发明专利]一种Nucyep的编码基因、重组表达载体、重组工程菌及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201811245986.3 | 申请日： | 2018-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN109337887B | 公开（公告）日： | 2021-04-27 |
| 发明（设计）人： | 葛燕;王辂;李端华;赵晨;李进军;刘涛 | 申请（专利权）人： | 成都大学 |
| 主分类号： | C12N9/22 | 分类号： | C12N9/22;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/34 |
| 代理公司： | 成都顶峰专利事务所(普通合伙) 51224 | 代理人： | 李林 |
| 地址： | 610000*** | 国省代码： | 四川;51 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 nucyep 编码 基因 重组 表达 载体 工程 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种Nucyep的编码基因，其特征在于：所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
2.一种重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体由权利要求1所述的核苷酸序列通过NdeI和XhoI酶切位点插入pET-24a(+)载体重组而成。
3.一种重组工程菌，其特征在于：所述重组工程菌由权利要求2所述的重组表达载体转化入宿主菌制备而成，所述宿主菌为
4.一种Nucyep的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）发酵培养权利要求3所述重组工程菌，使用乳糖作为诱导剂进行诱导表达Nucyep，得到含有Nucyep的发酵菌液；
（2）离心所述发酵液，取沉淀，使用缓冲液重悬沉淀后进行超声或匀浆处理，离心得到含Nucyep的不可溶包涵体；
（3）对上述包涵体进行溶解和复性，得到有活性Nucyep的粗酶；
（4）将Nucyep的粗酶过阴离子交换柱得到纯化Nucyep。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中的复性过程包括如下步骤，用尿素溶液重悬包涵体，得到包涵体尿素溶解液，将包涵体尿素溶解液滴入复性缓冲液，4℃静置过夜，离心取上清，即得Nucyep；所述尿素溶液中尿素的浓度为6~8 mol/L。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述包涵体尿素溶解液中包涵体的质量与尿素溶液体积的比例为1g:50mL。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：将包涵体尿素溶解液滴入复性缓冲液的过程中，包涵体尿素溶解液与复性缓冲液的体积比为1:5~1:10；复性缓冲液配方为：20mmol/L Tris-Cl，20 mmol/L MgCl2，pH为7.2。
8.一种用权利要求4-7任意一项所述的制备方法所制备的Nucyep用于非治疗目的的降解核酸的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述核酸选自双链DNA，单链DNA，或RNA。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于成都大学，未经成都大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201811245986.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
