[发明专利]一种免疫细胞的培养方法

说明书

本发明公开了一种免疫细胞的培养方法，包括以下步骤：(1)采集外周血单个核细胞；(2)将上述细胞接种于含有培养基的培养瓶中进行培养；(3)将经过上述步骤(2)培养后的细胞导入培养袋中，其中培养液的体积小于培养袋的容积；(4)收获免疫细胞。本发明提供一种免疫细胞的培养方法，通过控制培养过程中培养液体积和培养袋容积的比例，提高细胞的扩增能力和最终得到的细胞数量，实现免疫细胞的大量增殖，提高了培养液的利用率，节约了成本。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，尤其涉及一种免疫细胞的培养方法。

背景技术

目前，恶性肿瘤是严重危害人类健康的一种疾病，是死亡的主要原因之一，其发生和发展主要是由于人体防御系统对癌细胞失去调节和控制，导致机体和肿瘤之间失去平衡所致。传统的治疗手段包括手术治疗、放射治疗和化学治疗，研究表明，手术、放疗、化疗能治愈肿瘤并不是杀死了全部肿瘤细胞，而是由于当肿瘤负荷明显降低时，机体的免疫功能恢复，从而清除了微小病灶或明显抑制残留肿瘤细胞的增殖。肿瘤免疫治疗就是通过人为干预，激发和调动机体的免疫系统，增强抗肿瘤免疫力，从而控制和杀伤肿瘤细胞。

过继性免疫治疗(adoptive cellular immunotherapy，ACI)是目前较为常用的一种肿瘤免疫治疗方式，是通过体外大量培养扩增具有抗肿瘤作用的免疫效应细胞，来直接杀伤肿瘤或激发机体抗肿瘤免疫反应的一种治疗方式。此类细胞主要包括：淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)、自然杀伤细胞(NK)或经基因技术改造的T淋巴细胞(例如CAR-T、TCR-T)等。

就免疫细胞治疗来说，足够数量的效应细胞是保证治疗效果的必备条件，因此为获得足够的免疫细胞数量，技术人员正不断通过研究和试验对生产细胞的各个方面进行改进，通过增加培养液的用量来提高免疫细胞数量是最简单有效的办法，技术人员为使免疫细胞数量达到治疗要求，对单个培养袋中培养液的使用体积一般都会达到细胞培养袋容积的最大值或在其最大值上下窄幅波动，以尽可能多的提升培养液用量。虽然这种办法在一定程度上提高了细胞数量，但严重降低了培养液的培养效率，最终获得的免疫细胞数量也十分有限，效果不佳。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种免疫细胞的培养方法，可以有效提高免疫细胞的培养数量，大大提高了培养液的利用率以及细胞的培养数量。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种免疫细胞的培养方法，包括以下步骤：

(1)采集外周血单个核细胞；

(2)将上述细胞接种于含有培养基的培养瓶中进行培养；

(3)将经过上述步骤(2)培养后的细胞导入培养袋中，其中培养液的体积小于培养袋的容积；

(4)收获免疫细胞。

进一步地，上述步骤(3)中培养液的体积和培养袋容积的比例为0.42-0.55:1。

进一步地，上述步骤(2)中的细胞接种于培养瓶中后放于37℃，饱和湿度，5％CO₂培养箱中培养3-5天。

进一步地，上述步骤(2)中的培养瓶中以及步骤(3)的培养液中均添加有细胞因子。

进一步地，上述步骤(3)中将细胞导入培养袋，补充培养液，继续培养至第2-7天后进行扩大培养。

进一步地，将上述步骤(3)中进行扩大培养的细胞培养至第4-14天后进行离心，洗涤后即得免疫细胞。

进一步地，所述免疫细胞为CIK细胞、TIL细胞、NK细胞中的一种。