[发明专利]GnRH类似物－抗肿瘤药物偶联物、其制备方法及用途

权利要求书

1.一种GnRH类似物－抗肿瘤药物偶联物，其特征在于所述偶联物具有如下所示的结构:

GnRHa-Linker-Dox

其中，GnRHa为GnRH类似物，其肽序列为pGlu¹-His²-Trp³-Ser⁴-Tyr⁵-_D-Cys⁶-Leu⁷-Arg⁸-Pro⁹-NHEt；Linker为连接臂，用于将GnRHa与抗肿瘤药物偶联；Dox为抗肿瘤药物阿霉素，所述连接臂具有下式所示的结构：

其中n = 0、1、2、3、4；

所述偶联物具有下式所示的结构：

。

2.一种GnRH类似物－抗肿瘤药物偶联物的制备方法，所述方法包括以下步骤：

（1）制备[_D-Cys⁶-desGly¹⁰-Pro⁹-NHEt]-GnRH：

采用固相多肽合成法，在N,N'-二异丙基乙胺存在的条件下由9-芴甲氧羰基保护氨基的脯氨酸和取代度为1.3mmol/g 的2-CTC树脂反应得到Fmoc-Pro-CTC树脂，其中2-CTC树脂与N,N'-二异丙基乙胺与9-芴甲氧羰基保护氨基的脯氨酸的摩尔比为1：3：3；所得Fmoc-Pro-CTC树脂经过体积浓度为20%的哌啶/N, N'-二甲基甲酰胺溶液除去Fmoc保护基团后，以N, N'-二异丙基碳二亚胺/1-羟基苯并三唑为缩合试剂，按照肽序列从C端向N端逐步偶联氨基酸得到全保护肽树脂，其中Fmoc-Pro-CTC树脂、N, N'-二异丙基碳二亚胺、1-羟基苯并三唑和Fmoc-氨基酸的摩尔比为1:4.5:4.5:4.5，偶联时间为2 h；按照质量体积比为1g:10mL的比例向所述全保护肽树脂中添加体积浓度为2%三氟乙酸的二氯甲烷中溶液切肽；所得全保护肽用质量体积比为1g:5mL的二氯甲烷溶解，通过N,N'-二异丙基乙胺调节体系pH为9，加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷和乙胺盐酸盐，其中全保护肽与六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷和乙胺盐酸盐的摩尔比为1：1.5：1.5，HPLC监控反应进程，反应完毕后将体系减压浓缩，按照质量体积比为1g:10mL的比例向所得产物中加入体积比为90/5/3/2的三氟乙酸/甲基苯基硫醚/1, 2-乙二硫醇/苯甲醚的裂解液脱除侧链保护基团，室温反应2 h后将体系减压浓缩，然后用10倍于反应浓缩液体积的冰乙醚沉降、洗涤，所得固体用反相高效液相色谱纯化、冷冻干燥后得到[_D-Cys⁶-desGly¹⁰-Pro⁹-NHEt]-GnRH纯品；

（2）制备阿霉素衍生物

将阿霉素盐酸盐、异双功能基团连接臂和三乙胺用无水N, N'-二甲基甲酰胺溶解，其中阿霉素盐酸盐、异双功能基团连接臂和三乙胺的摩尔比为1：1.0 ~ 2.0：2.0 ~ 3.0，室温搅拌反应1~3 h；反应完毕后用2 ~ 5倍于反应液体积的冰乙醚沉降，所得沉淀用冰乙醚洗涤，真空恒温干燥得阿霉素衍生物；

所述的异双功能基团连接臂为2-马来酰亚胺基乙酸羟基琥珀酰亚胺酯、3-马来酰亚胺基丙酸羟基琥珀酰亚胺酯、4-马来酰亚胺基丁酸羟基琥珀酰亚胺酯、5-马来酰亚胺基戊酸羟基琥珀酰亚胺酯或6-马来酰亚胺基己酸羟基琥珀酰亚胺酯；

（3）[_D-Cys⁶-desGly¹⁰-Pro⁹-NHEt]-GnRH与阿霉素衍生物的偶联

将步骤（1）得到的[_D-Cys⁶-desGly¹⁰-Pro⁹-NHEt]-GnRH与步骤（2）得到的阿霉素衍生物用N, N'-二甲基甲酰胺溶解，以三乙胺为催化剂，其中[_D-Cys⁶-desGly¹⁰-Pro⁹-NHEt]-GnRH、阿霉素衍生物和三乙胺的摩尔比为1：1.0 ~ 2.0：15.0 ~ 25.0；N₂保护下室温搅拌反应1~3h，反应完毕后用8 ~ 10倍于反应液体积的冰乙醚沉降、洗涤，所得固体用反相高效液相色谱纯化、冷冻干燥后得到所述GnRH类似物－抗肿瘤药物偶联物，所述偶联物具有下式所示的结构：

其中n = 0、1、2、3、4。