[发明专利]一种细菌纤维素高产菌株的构建方法在审
| 申请号： | 201811193614.0 | 申请日： | 2018-10-15 |
| 公开（公告）号： | CN109182243A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 钟成;尤勇;贾士儒 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/90;C12P19/04;C12R1/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300457 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细菌纤维素高产菌株 构建 细菌纤维素 葡萄糖脱氢酶基因 抗性标记基因 葡萄糖 醋酸杆菌 蛋白表达 菌株生产 同源重组 菌株 敲除 外源 引入 | ||
1.一种细菌纤维素高产菌株的构建方法，其特征在于，所述方法为：
(1)葡萄糖脱氢酶编码基因的敲除：利用同源重组的方法对木葡萄糖醋酸杆菌目的基因进行基因敲除。
(2)敲除子的筛选：通过氨苄平板对敲除子进行筛选。
(3)氨苄抗性的消除：外源导入FLP合成系统对抗性标记进行消除。
(4)发酵培养：重组菌株发酵培养及产量的测定。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，消除或减弱葡萄糖酸合成能力是指葡萄糖酸合成过程中所涉及到的葡萄糖脱氢酶的活性部分或完全缺失。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述方法还包括增强细菌纤维素生产菌株中细菌纤维素合成途径以及异源表达生产细菌纤维素。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将葡萄糖脱氢酶基因敲除后，将导致培养过程中产酸能力降低且提高菌体生长能力从而提高细菌纤维素得率。
5.根据权利要求1所述的木葡萄糖醋酸杆菌，其特征在于，通过基因工程的手段敲除木葡萄糖醋酸杆菌中葡萄糖脱氢酶的编码区域，再通过外源引入FLP重组酶消除抗性筛选标记。
6.根据权利要求1所述的木葡萄糖醋酸杆菌，其特征在于，丧失或低水平表达葡萄糖脱氢酶。
7.一种细菌纤维素高产菌株的构建方法，其特征在于，包括权利要求5-8任一所述的重组的木葡萄糖醋酸杆菌；同时也包括通过增强木葡萄糖醋酸杆菌中纤维素合成酶表达能力或外源表达生产细菌纤维素的工程菌株。
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