[发明专利]嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、CD22-CD19双靶向性的T细胞及其应用

说明书

本发明属于肿瘤生物制品领域，具体地，涉及嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、CD22‑CD19双靶向性的T细胞及其应用。所述嵌合抗原受体为CD22ScFv‑L‑CD19ScFv‑CD8‑CD137‑CD3ζ，包括依次串联的CD22ScFv、连接肽L、CD19ScFv、CD8的铰链区和跨膜区、CD137的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域。在治疗B细胞系恶性血液系统肿瘤时，本发明的嵌合抗原受体修饰的T细胞不仅能够特异性识别仅有其中CD19抗原或CD22抗原单个靶点表达的肿瘤细胞，而且还可以识别CD19抗原和CD22抗原两个靶点共表达的肿瘤细胞，较单靶点CAR T，双靶点CAR T具有更强的抗肿瘤活性，避免低丰度抗原表达的瘤细胞产生免疫逃逸，从而降低复发风险。

技术领域

本发明属于肿瘤生物制品领域，具体地，涉及一种嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、CD22-CD19双靶向性的T细胞及其应用。

背景技术

以急性淋巴细胞白血病、急性髓系白血病、非霍奇金淋巴瘤等为代表的血液系统恶性肿瘤在我国的发病率有不断增高趋势，并且以中青年为主要患病群体，严重威胁着我国人口的健康与生命。尽管以化疗、放疗、造血干细胞移植、以及分子靶向药物与治疗性抗体为主的治疗手段在很大程度上提高了疾病的缓解率，延长了患者生存期，但20-50%的患者在缓解后复发，同时约有30%左右的患者对目前已有的诱导缓解手段存在原发性抵抗。针对这种情况，需要探索寻找新的有效治疗策略。

CD19和CD22均在临床水平被确认为表达在大多数B细胞恶性肿瘤的特异性抗原，而在造血干细胞、血浆细胞和其他正常组织中不表达。CD19和CD22抗原与B细胞的生物特性密切相关，存在于B细胞成熟的各个阶段。在B细胞增殖和分化中起重要的调节作用。而且，CD19和CD22分子在细胞膜上比较暴露，容易接近，与单克隆抗体结合后无显著内化及脱落，也不会因为与抗体的结合而发生抗原调变。因此CD19和CD22抗原是B细胞系血液系统肿瘤治疗的理想靶点。

肿瘤免疫治疗经过多年的临床前探索与临床研究在近年取得了令人瞩目的突破性进展，尤其以PD-1抗体在治疗实体瘤以及靶向CD19的嵌合抗原受体修饰T细胞（CAR T）在治疗B细胞系恶性血液系统肿瘤中获得了显著的临床突破，包括B-ALL（B-cell acutelymphoblastic leukemia，B细胞急性淋巴细胞白血病），NHL（non-Hodgkins lymphoma，非霍奇金淋巴瘤），B-CLL（B-cell Chronic lymphocytic leukemia，B细胞慢性淋巴细胞白血病）。

尽管2013年以来全球公开报道的临床数据显示，针对CD19的CAR T治疗可以使60-90%的复发难治性B-ALL患者获得再次缓解，约50%的复发难治性NHL患者获得疾病控制与缓解，但同时也暴露出了一些迫切需要对该疗法进行优化与解决的问题。从较长期临床效果观察方面来讲，最为突出的问题是缓解之后的再次复发，如约40%左右的CD19-CAR T治疗缓解后的B-ALL患者在6个月后会再次复发。究其复发的原因，其中最为常见的原因为靶抗原CD19转变为阴性或者其他表型。

不管哪一种情况的CD19-CAR T后的复发，更换治疗靶点的CAR T细胞再输注可能再次显效，如近期有机构对CD19-CAR T复发后患者改为CD22-CAR T细胞输注的初步临床结果就证实了这一观点。这一初步的临床研究结果在指出“采用多靶点序贯性CAR T细胞输注治疗策略”可能是克服单靶点CAR T输注策略存在高复发率问题的同时，也暗示性的指出了“双靶点CAR T输注策略”可能是解决单靶点CAR T细胞治疗血液系统肿瘤不足之处的有效策略。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中CAR T对肿瘤治疗过程中效率低和复发风险高的缺陷，提供一种嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、工程化CD19和CD22双靶向性的T细胞及其制备方法和应用，嵌合抗原受体修饰的T细胞在治疗B细胞系恶性血液系统肿瘤，具有更强的抗肿瘤活性，且治疗后显著降低复发风险。