[发明专利]一种改进的氰基还原酶及其在合成3-氯吡嗪-2甲胺中的应用有效
| 申请号： | 201811108934.1 | 申请日： | 2018-09-21 |
| 公开（公告）号： | CN109182286B | 公开（公告）日： | 2021-07-30 |
| 发明（设计）人： | 高新星;韦平和;张鑫;何清明 | 申请（专利权）人： | 泰州学院 |
| 主分类号： | C12N9/06 | 分类号： | C12N9/06;C12P17/12 |
| 代理公司： | 南京禹为知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32272 | 代理人： | 王晓东 |
| 地址： | 225300 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 改进 还原酶 及其 合成 氯吡嗪 中的 应用 | ||
1.一种改进的氰基还原酶，其特征在于：所述改进的氰基还原酶是以SEQ ID No.2所示氨基酸序列为出发序列，将第120位丙氨酸突变为亮氨酸，并将第155位的谷氨酸突变为赖氨酸得到的突变体，氨基酸序列为SEQ ID No.4所示。
2.一种改进的氰基还原酶，其特征在于：所述改进的氰基还原酶，包括，以SEQ ID No.2所示氨基酸序列为出发序列，将第59位酪氨酸突变为丙氨酸，第120位的丙氨酸突变为亮氨酸，第155位的谷氨酸突变为赖氨酸，第211位的谷氨酸突变为精氨酸，氨基酸序列为SEQ IDNo.6所示。
3.一种改进的氰基还原酶，其特征在于：所述改进的氰基还原酶，包括，以SEQ ID No.2所示氨基酸序列为出发序列，将第59位酪氨酸突变为丙氨酸，第75位的甘氨酸突变为脯氨酸，第120位的丙氨酸突变为亮氨酸，第137位的苏氨酸突变为丝氨酸，第155位的谷氨酸突变为赖氨酸，第169位的丙氨酸突变为苏氨酸，第211位的谷氨酸突变为精氨酸，氨基酸序列为SEQ ID No.8所示。
4.权利要求1~3中任一所述的改进的氰基还原酶在催化2-氯-3-氰基吡嗪发生还原反应生成3-氯吡嗪-2甲胺中的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的改进的氰基还原酶在催化2-氯-3-氰基吡嗪发生还原反应生成3-氯吡嗪-2甲胺中的应用是在pH6~8的磷酸钾缓冲液中，分别添加葡萄糖、辅酶NADP、2-氯-3-氰基吡嗪、葡萄糖脱氢酶以及权利要求1~3任一所述改进的氰基还原酶组成反应混合液，进行还原反应生成3-氯吡嗪-2甲胺。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述进行还原反应生成3-氯吡嗪-2甲胺，反应温度为30~40℃，反应时间为24 h。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述反应混合液，其中葡萄糖浓度为25~50g/L、辅酶NADP浓度为3~7 mg/L、2-氯-3-氰基吡嗪浓度为20~50 mmol/L、葡萄糖脱氢酶的浓度为2~4 g/L、氰基还原酶的浓度为0.6~1.4 g/L、磷酸钾缓冲液的浓度为50~100 mmol/L。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于：所述反应混合液，其中葡萄糖浓度为50 g/L、辅酶NADP浓度为7 mg/L、2-氯-3-氰基吡嗪浓度为50 mmol/L、葡萄糖脱氢酶的浓度为4 g/L、氰基还原酶的浓度为1.4 g/L。
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