[发明专利]一种马铃薯X病毒粒体的原位分离固定电子显微镜诊断方法在审
申请号: | 201811105112.8 | 申请日: | 2018-09-21 |
公开(公告)号: | CN109211954A | 公开(公告)日: | 2019-01-15 |
发明(设计)人: | 张仲凯;方琦;张丽珍 | 申请(专利权)人: | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 |
主分类号: | G01N23/22 | 分类号: | G01N23/22;G01N23/2202 |
代理公司: | 昆明知道专利事务所(特殊普通合伙企业) 53116 | 代理人: | 谢乔良 |
地址: | 650223 *** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 马铃薯X病毒 电子显微镜 原位分离 粒体 诊断 电镜观察 染色 切丝 取样 用时 分析 | ||
1.一种马铃薯X病毒粒体的原位分离固定电子显微镜诊断方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)取1mm×2mm×6mm大小的感病组织;
(2)将所述感病组织用徒手切片法切成细丝;
(3) 加入固定液固定2~3min;
(4)将覆盖有Formvar膜和碳膜的铜网膜面朝下吸附样品浸出液1~3 min,然后用滤纸沿铜网边缘吸附,膜面朝上放置1 min;
(5)将染液滴于疏水膜上,再将所述铜网面朝下置于染液染色1~3 min,然后用滤纸沿铜网边缘吸附,膜面朝上放置1 min;
(6)透射电镜上样、观察和拍照;
(7)根据病毒粒体的分布与聚集特征进行判断。
2.根据权利要求1所述马铃薯X病毒粒体的原位分离固定电子显微镜诊断方法,其特征在于,所述感病组织为叶片、茎或块茎。
3.根据权利要求1所述马铃薯X病毒粒体的原位分离固定电子显微镜诊断方法,其特征在于,步骤(2)所述细丝直径为0.01~0.03mm。
4.根据权利要求1所述马铃薯X病毒粒体的原位分离固定电子显微镜诊断方法,其特征在于,所述固定液为2.5%戊二醛,用量为0.2 mL。
5.根据权利要求1所述马铃薯X病毒粒体的原位分离固定电子显微镜诊断方法,其特征在于,步骤(4)吸附样品浸出液的时间为2 min。
6.根据权利要求1所述马铃薯X病毒粒体的原位分离固定电子显微镜诊断方法,其特征在于,所述染液为2%钼酸铵染液,用量为0.1 mL。
7.根据权利要求1所述马铃薯X病毒粒体的原位分离固定电子显微镜诊断方法,其特征在于,步骤(5)所述染色时间为2 min。
8.根据权利要求1所述马铃薯X病毒粒体的原位分离固定电子显微镜诊断方法,其特征在于,所述透射电镜的参数设置为:
(1)加速电压:60~80 kV;
(2)放大倍数: 20,000~50,000倍。
9.根据权利要求1所述马铃薯X病毒粒体的原位分离固定电子显微镜诊断方法,其特征在于,步骤(7)所述病毒粒体的分布与聚集特征为:
(1)个体特征:线状,稍微弯曲,直径12~13nm,长度510~520nm,散布或规则排列;
(2)聚集特征:呈集块状交叉聚集和束状、少部分交叉聚集。
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