[发明专利]快速检测出入境旅客携带物中违禁成分的试剂盒

说明书

本发明提供一种快速检测出入境旅客携带物中违禁成分的试剂盒，包括样品处理体系、LAMP扩增反应体系、核酸免疫胶体金试纸条、阳性标准品、阴性标准品；检测步骤主要包括提取待测样品DNA、配制LAMP反应体系、LAMP扩增反应、核酸免疫胶体金试纸条检测；操作简便、快速、精确、低价，不仅能够检测牛源性成分还能检测羊源性成分，同时又能有效区分其他反刍类的动物源，如马、驴、鹿等等，对化妆品中动物源性检测的特异性高，极大的避免假阳性，避免在口岸检测一线的检察人员与旅客产生纠纷，核酸扩增保证检测的特异性和敏感性，又通过固相化的胶体金检测，实现直观性和简便性，非常适合用于出入境的口岸检验检疫人员进行现场检测。

技术领域

本发明涉及一种出入境关卡检测旅客携带违禁成分的新手段，特别是涉及一种快速检测出入境旅客携带物中违禁成分的试剂盒。

背景技术

可传播性海绵状脑病(Transmissible spongiform encephalopathies，TSE)是一类侵袭人类及多种动物中枢神经系统的退行性脑病，潜伏期长，100％致死率，并可在同种动物间传播。自1730年首次报道羊搔痒病以来，目前已经在人类以及20余种动物中发现有自然发生或感染的TSE，其中包括人类的克-雅氏病(Creutzfeldt-Jacob disease，CJD)以及动物的羊瘙痒病、疯牛病等。

具有美白、祛斑、抗皱、抗衰老作用的化妆品中大多含有从牛、羊的脑及神经组织、内脏、胎盘和血液中提取的成分，如果制成这些成分的原料来自于感染疯牛病的临床前期的牛，或是组织在取材时遭到了污染，或是加工过程中不能够很好地灭活感染因子，那么这些污染了疯牛病感染因子的化妆品在长期的使用中仍具有危险性。

由于疯牛病无任何有效预防和有效医治的手段，因此为了保卫我国国家安全和人民健康，从2002年开始我国颁布了一系列法律条文禁止进口和销售含有发生“疯牛病”国家或地区牛、羊的脑及神经组织、内脏、胎盘和血液(含提取物)等动物源性原料成份(简称“牛羊动物源性原料成份”)的化妆品，或者对来自疯牛病疫区国家的化妆品等一律要求提供对方国家相关机构出具的不含牛羊动物源性原料的证明，凡是不能提供的均需要卫生处理或退回处理。但是随着人民的生活水平的不断提高，人民对化妆品、日用品等的质量和功效要求越来越高，越来越多的人在国外购买日用品、化妆品等携带入境。很多入境人员没有意识到违禁物品不能带入国内的重要性，常常更换购买物品的包装或撕去配方表，导致检查人员无法有效快速检测其成分。

目前对旅客携带化妆品中怀疑有违禁成分时，一般需要进行测序方法或PCR方法。PCR虽然特异性和敏感性高，但样品前处理繁琐费时，实验周期长；需要特殊的仪器（实时定量PCR仪或普通PCR仪和凝胶电泳仪等），检测成本高；在一个反应体系中若对多种动物源进行鉴定，极易出现假阳性和假阴性，且需要专门的分析技术人员，检测场所也局限于有条件的实验室中，不能满足现场快速检测的需要。因此建立快速、灵敏、操作简便、无需仪器的检测方法对于口岸检验检疫人员现场检疫工作具有高度的意义。

环介导等温扩增技术，英文名称为loop-mediated isothermal amplification，缩写为LAMP。环介导等温扩增技术能在等温（60-65℃）条件下，短时间（通常是一小时内）内进行核酸扩增，是一种“简便、快速、精确、低价”的基因扩增方法。与常规PCR相比，不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，是一种全新的核酸扩增方法，具有简单、快速、特异性强的特点。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术，不依赖任何专门的仪器设备实现现场高通量快速检测，检测成本远低于荧光定量PCR。该技术即可以通过核酸扩增保证检测的特异性和敏感性，又通过固相化的胶体金检测，实现直观性和简便性，非常适合用于基层和现场检测目的。目前该技术在检测化妆品中是否含有牛源和羊源性物质的应用还处于空白，有很大的应用前景。

发明内容