[发明专利]编码昆虫气味受体的基因及其蛙卵表达载体的构建方法在审
| 申请号： | 201811061375.3 | 申请日： | 2018-09-12 |
| 公开（公告）号： | CN109136230A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 张亚楠;朱秀云;贺鹏;徐继伟 | 申请（专利权）人： | 淮北师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙) 61223 | 代理人： | 李振瑞 |
| 地址： | 235000 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 气味受体 夜蛾 基因 构建 编码昆虫 表达载体 蛙卵 触角 非洲爪蟾卵母细胞 生物技术领域 核苷酸序列 新型杀虫剂 蛾类害虫 基因序列 理论基础 农业害虫 生理功能 载体构建 作用机制 成虫 氨基酸 总RNA 雄虫 嗅觉 蛋白质 克隆 合成 回收 开发 分析 | ||
1.一种编码昆虫气味受体的基因，其特征在于，编码昆虫气味受体的基因为气味受体基因ORCO，ORCO的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，氨基酸如SEQ ID NO.4所示。
2.一种利用权利要求1所述的编码昆虫气味受体的基因构建蛙卵表达载体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，提取二点委夜蛾雄虫成虫触角总RNA，并合成二点委夜蛾cDNA；
S2，气味受体基因ORCO的克隆、回收、纯化
以二点委夜蛾cDNA为模板，以反向引物5’-TCAACTAGTGCCACCATGATGACCAAAGTGAAGACCCAG-3’，正向引物5’-TCACTCGAGTTACTTGAGTTGCACCAACACCAT-3’进行PCR扩增，对PCR产物进行回收、纯化；
S3，构建二点委夜蛾气味受体基因ORCO蛙卵表达载体pT7TS-ORCO
将pT7TS载体经BglⅡ和SpeⅠ双酶切，得到pT7TS酶切产物；将S2回收的PCR产物经BglⅡ和SpeⅠ双酶切，得到夜蛾酶切产物；将pT7TS酶切产物和夜蛾酶切产物连接，得到二点委夜蛾ORCO基因蛙卵表达载体pT7TS-ORCO。
3.根据权利要求2所述的构建蛙卵表达载体的方法，其特征在于，S2中，PCR扩增体系如下：1μl夜蛾cDNA、2.5μl 10×Ex PCR Buffer、0.5mmol/L dNTP、GSPs 0.4μmol/L、UPM/NUPM1μmol/L和2.5U Taq DNA聚合酶；
PCR反应条件如下：95℃预变性3min；95℃变性50s，70℃退火1min，72℃延伸1min，退火温度从70℃降至60℃，每个循环降1℃，然后60℃维持1min，循环25次；72℃延伸10min，4℃保持。
4.根据权利要求2所述的构建蛙卵表达载体的方法，其特征在于，将二点委夜蛾ORCO基因蛙卵表达载体pT7TS-ORCO转化至感受态细胞，保存备用。
5.根据权利要求4所述的构建蛙卵表达载体的方法，其特征在于，所述感受态细胞为Trans-T1感受态细胞。
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