[发明专利]一种同时鉴别鸡、鸭、羊种属来源的PCR-STR方法

说明书

本发明属于法医学新技术研究领域，具体涉及公开一种适用于鸡、鸭、羊物种种属来源鉴别研究的新的3个短串联重复序列（Short tandem repeat，STR）位点的复合扩增分型检测体系及基于毛细管电泳的同步并行基因分型检测方法。采用三种荧光物质（HEX、TAMRA和ROX）对3个STR位点的引物分别进行荧光标记，实现3个STR位点在同一扩增体系中复合扩增及同步并行检测。本发明所述的检测体系具有种属特异性、操作简便快捷、结果容易判读的优势，并且可以对血液、组织、器官、毛发等多种生物检材进行检测。所选择的物种特异性的STR位点在各自的物种中具有高度的种属特异性，可以实现对鸡、鸭、羊三种物种种属来源的鉴别，为法医学、食品检验等领域的物种来源的鉴定研究提供新且有效的检测方法。

技术领域

本发明属于法医学新技术研究领域，具体涉及公开一种适用于鸡、鸭、羊物种种属来源鉴别研究新的3个短串联重复序列（Short tandem repeat，STR）位点的复合扩增分型检测体系及基于毛细管电泳的同步并行基因分型检测方法。

背景技术

种属鉴定是指对动物的生物性检材的种属来源进行鉴识研究。随着科技的进步和社会的发展，种属鉴定在食品检验、法科学、濒危物种保护等领域具有广泛的应用。目前，对于动物种属鉴别研究主要是基于形态学、血清学和DNA检测方法。形态学方法相对比较简单，但是方法过于粗糙，受测试者的主观因素影响比较大。血清学的方法对种属来源的鉴定具有较高的价值，可以区分出人源性与非人源性的血痕检材，但无法对具体动物的种属来源作出鉴定；而且血清学检测方法仅仅适用于血液样本的检测，不能对组织、毛发等检材的检测，限制了该方法的实际应用；此外，该方法受环境因素影响较大，存在特异性不高的缺陷。相比以上方法，DNA分子具有稳定性强、特异性高、分析结果容易判读的优势；此外，物种间的根本区别在于DNA碱基序列的差异，尤其是对不同种属的物种；因此DNA的检测方法成为动物物种种属来源鉴定的理想途径。

STR是基因组中广泛分布的遗传标记之一，也是目前遗传学研究的热点之一。STR遗传标记具有多态性好、特异性强的优势，已经被广泛用于法医遗传学等多个领域的研究。通过选择在物种间具有种属特异性强的STR位点，可以实现不同物种的鉴识研究。因此，基于STR遗传标记开发用于不同物种种属来源鉴识研究的试剂盒相比形态学、血清学方法具有较高的优势。为此，我们基于NCBI中的Nucleotide数据库，筛选出鸡、鸭、羊物种种属特异性强的STR位点各一个，基于法医学中复合扩增体系构建的理论知识和相关技术，采用3种荧光物质标记这些位点的引物，实现这些位点的同时分型检测。

发明内容

本发明的内容是基于毛细管电泳的技术平台，开发一种适用于鸡、鸭、羊物种种属鉴识研究新的3个STR位点的复合扩增检测体系。

本发明所构建的体系，不仅能够对血液进行检测，而且可以对组织、器官、毛发等各种生物样本进行检测。

在本发明的实施方案中，每个物种所选择的种属特异性的STR位点、标记的荧光染料、相应的引物序列信息和扩增片段大小如下。

根据既往报道的文献和鸡、鸭、羊物种的基因数据库筛选具有种属特异性的STR位点；同时采用NCBI BLAST工具初步评估筛选位点的种属特异性；每个物种各选出3个位点用于进一步评估；采用Primer 5.0 软件设计位点的引物，然后对位点的物种特异性进行单一PCR扩增验证，同时评估位点的实际扩增效果，最终每个物种各保留一个位点用于复合扩增体系的构建。鸡、鸭、羊物种最终确定的位点分别是MCW21、APH13和 M82875。

本发明的另一个目的是提供STR位点的检测方法，所述试剂盒主要用于鸡、鸭、羊物种的种属鉴识研究；具体步骤如下。