[发明专利]一种同时鉴别鸡、鸭、羊种属来源的PCR-STR方法在审
申请号: | 201811047312.2 | 申请日: | 2018-09-09 |
公开(公告)号: | CN109136390A | 公开(公告)日: | 2019-01-04 |
发明(设计)人: | 朱波峰;靳小业;郭瑜鑫;崔伟 | 申请(专利权)人: | 朱波峰;靳小业;郭瑜鑫;崔伟 |
主分类号: | C12Q1/6888 | 分类号: | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
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地址: | 710004 陕西省西安市*** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 法医学 复合扩增 检测 鉴别 食品检验 短串联重复序列 物种 基因分型检测 毛细管电泳 并行检测 分型检测 技术研究 鉴定研究 扩增体系 来源鉴别 生物检材 物种来源 荧光标记 荧光物质 判读 位点 引物 毛发 并行 器官 血液 研究 | ||
1.开发一种基于毛细管电泳分型技术,用于鸡、鸭、羊物种种属来源鉴别研究新的3个短串联重复序列(Short tandem repeat,STR)位点的复合扩增分型检测体系,本发明采用三种荧光染料标记3个STR位点的引物,实现这些位点的复合扩增和同步检测,每个物种种属特异性的位点以及标记的荧光物质如下。
2.根据权利要求1所述的检测体系,其特征在于,所述试剂盒包含3个STR位点的引物,具体如下。
3.根据权利要求1所述的检测体系,其特征在于,所述检测组分包括2.5×Master mix,5×Primer mix,5U/μL Taq DNA聚合酶,去离子水,去离子甲酰胺溶液和AGCU Marker SIZ-500 DNA分子量内标。
4.权利要求书1-3任一项所述检测体系的检测方法,所述的检测方法可以对血液、组织、器官和毛发等多种检材进行检测,适用于鸡、鸭、羊物种种属来源的鉴别研究,具体步骤如下:(1)提取鸡、鸭、羊物种检材的DNA样本,采用所述检测体系中的试剂进行3个STR位点的复合PCR反应;PCR反应体系包括10μL 2.5×Master mix,5μL 5×Primer mix,1μL 5U/μLTaq DNA聚合酶,2μL样本DNA和7μL的去离子水;复合PCR循环反应条件如下:95℃预变性2min;然后94℃变性30s,60℃退火1min,72℃延伸1min,共30个循环;60℃终延伸30 min;(2)取1µl的PCR产物加至8.5μL的去离子甲酰胺和0.5μL AGCU Marker SIZ-500的混合液中混匀;混合物在95℃变性3min,立即置冰上冷却3min;采用毛细管电泳遗传分析仪对3个STR点进行分型检测;(3)结果判读、数据处理与分析。
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