[发明专利]一种亚硝基胍诱变米曲霉漆酶降解葵花粕中木质素的方法

说明书

本发明公开了一种亚硝基胍诱变米曲霉漆酶降解葵花粕中木质素的方法，涉及生物降解领域。本发明包括如下步骤：S01：在培养皿中通过亚硝基胍对米曲霉高产漆酶进行诱变；S02：选取突变型的菌株转接至PDA板培养；S03：将液体菌种以体积比20％‑50％接种到漆酶产酶培养基；S04：对粗米曲霉高产漆酶进行提纯；S05：葵花粕洗净烘干后粉碎成粒；S06：在无菌罐内加入葵花粕粒和培养营养液，搅拌至固液混合均匀并显平坦状；S07：在无菌罐中接种米曲霉高产漆酶；S08：木质素降解完成。本发明通过亚硝基胍诱变米曲霉高产漆酶，对得到粗漆酶进行提纯，利用在无菌罐中漆酶与葵花粕的发酵快速降解木质素，提高了木质素的降解转化效率，降解效果稳定。

技术领域

本发明属于生物降解领域，特别是涉及一种亚硝基胍诱变米曲霉漆酶降解葵花粕中木质素的方法。

背景技术

亚硝基胍(NTG)，用于诱变育种，是一种公认效果显著的化学超诱变剂；亚硝基胍属烷化剂，而烷化剂是突变中一类相当有效的化学诱变剂，这类诱变剂具有1个或多个活性烷基，它们易取代DNA分子中活泼的氢原子，使DNA分子上的碱基及磷酸部分被烷化，DNA复制时导致碱基配对错误而引起突变。

米曲霉高产漆酶主要降解木质素中的酚型结构，米曲霉高产漆酶在介体存在时对非酚型结构也具有降解作用。米曲霉高产漆酶的复合作用不仅有利于木质素大分子中多样化的木质素结构基团的同步降解，而且有利于抑制木质素降解产物的再聚合。当前，已有少数工艺利用几种木质素酶复合降解木质素。但这些工艺通常利用粗酶液进行木质素的降解，如河南天冠企业集团有限公司利用白腐菌粗漆酶和粗过氧化物酶协同降解秸秆木质素促进燃料乙醇的转化效率。但由于米曲霉高产漆酶中成分非常复杂，很难确定木质素降解是木质素酶还是其它成分的作用，且每批次酶液的成分都不可能保持一致，因此可能导致处理效果不稳定。

发明内容

本发明的目的在于提供一种亚硝基胍诱变米曲霉漆酶降解葵花粕中木质素的方法，通过亚硝基胍诱变米曲霉高产漆酶，对得到粗漆酶进行提纯，利用在无菌罐中漆酶与葵花粕的发酵快速降解木质素，解决了现有的米曲霉高产漆酶成分不能保持一致、转化效率低的问题。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明为一种亚硝基胍诱变米曲霉漆酶降解葵花粕中木质素的方法，包括如下步骤：

步骤S01：在培养皿中通过亚硝基胍对米曲霉高产漆酶进行诱变；

步骤S02：选取突变型的菌株转接至PDA板培养，得到液体菌种；

步骤S03：将液体菌种以体积比20％-50％接种到漆酶产酶培养基，获取粗米曲霉高产漆酶；

步骤S04：对粗米曲霉高产漆酶进行提纯，得到米曲霉高产漆酶；

步骤S05：葵花粕洗净烘干后粉碎成粒；

步骤S06：在无菌罐内加入葵花粕粒和培养营养液，搅拌至固液混合均匀并显平坦状；

步骤S07：在无菌罐中接种米曲霉高产漆酶；

步骤S08：培养结束后，105℃下烘干至恒重，木质素降解完成。

优选地，所述步骤S01中，米曲霉高产漆酶的具体的诱变方法如下：

步骤Y01：在培养皿中的完全固定培养基表面涂布待处理的米曲霉高产漆酶悬液；

步骤Y02：在培养皿中央加上亚硝基胍晶体；

步骤Y03：通过接种环紧靠亚硝基胍制菌圈外侧；

步骤Y04：将菌苔挑置与无菌生理盐水中制成菌悬液；

步骤Y05：对菌悬液的突变型进行选择。