[发明专利]一种亚硝基胍诱变米曲霉漆酶降解葵花粕中木质素的方法

权利要求书

1.一种亚硝基胍诱变米曲霉漆酶降解葵花粕中木质素的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤S01：在培养皿中通过亚硝基胍对米曲霉高产漆酶进行诱变；

步骤S02：选取突变型的菌株转接至PDA板培养，得到液体菌种；

步骤S03：将液体菌种以体积比20％-50％接种到漆酶产酶培养基，获取粗米曲霉高产漆酶；

步骤S04：对粗米曲霉高产漆酶进行提纯，得到米曲霉高产漆酶；

步骤S05：葵花粕洗净烘干后粉碎成粒；

步骤S06：在无菌罐内加入葵花粕粒和培养营养液，搅拌至固液混合均匀并显平坦状；

步骤S07：在无菌罐中接种米曲霉高产漆酶；

步骤S08：培养结束后，105℃下烘干至恒重，木质素降解完成。

2.根据权利要求1所述的一种亚硝基胍诱变米曲霉漆酶降解葵花粕中木质素的方法，其特征在于，所述步骤S01中，米曲霉高产漆酶的具体的诱变方法如下：

步骤Y01：在培养皿中的完全固定培养基表面涂布待处理的米曲霉高产漆酶悬液；

步骤Y02：在培养皿中央加上亚硝基胍晶体；

步骤Y03：通过接种环紧靠亚硝基胍制菌圈外侧；

步骤Y04：将菌苔挑置与无菌生理盐水中制成菌悬液；

步骤Y05：对菌悬液的突变型进行选择。

3.根据权利要求2所述的一种亚硝基胍诱变米曲霉漆酶降解葵花粕中木质素的方法，其特征在于，所述步骤Y01中，亚硝基胍对米曲霉高产漆酶诱变之间需要先对培养皿中的对米曲霉高产漆酶进行紫外线诱变，具体步骤为：先开启紫外灯余热20min-30min，稳定后启动培养皿中的无菌搅拌铁芯，使紫外线照射均匀，开启培养皿盖，取出处理箱，在红光下涂布培养皿，用黑布包裹平板PDA板，进行振荡培养。

4.根据权利要求2所述的一种亚硝基胍诱变米曲霉漆酶降解葵花粕中木质素的方法，其特征在于，所述步骤Y04中，菌苔要进行离心处理，反复有生理盐水洗涤离心10次以上，直至菌苔稀释至原来了的80-110倍。

5.根据权利要求1所述的一种亚硝基胍诱变米曲霉漆酶降解葵花粕中木质素的方法，其特征在于，所述步骤S03中，漆酶产酶培养基放置在25℃-37℃下静置培养5d-7d后，加入1-10mM藜芦醇，继续培养3d-15d后，培养物过滤获得粗米曲霉高产漆酶。

6.根据权利要求1所述的一种亚硝基胍诱变米曲霉漆酶降解葵花粕中木质素的方法，其特征在于，所述步骤S04中，粗米曲霉高产漆酶提纯依次经过硫酸铵沉淀、疏层析、离子交换柱层析和超滤管浓缩后得到电泳纯的米曲霉高产漆酶。

7.根据权利要求1所述的一种亚硝基胍诱变米曲霉漆酶降解葵花粕中木质素的方法，其特征在于，所述步骤S07中，无菌罐中接种米曲霉高产漆酶时，将无菌罐放置在28℃下160r/min振荡培养14d-20d；其中，每2d取样一次，测定发酵液中菌株的活性。

8.根据权利要求1所述的一种亚硝基胍诱变米曲霉漆酶降解葵花粕中木质素的方法，其特征在于，所述步骤S08完成后，还需通过Van Soest方法测定木质素的降解率；具体的降解公式为：

降解率＝[木质素的降解总量/原样品中木质素的总量]×100％。