[发明专利]一种人副流感病毒4型核酸检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种人副流感病毒4型核酸检测试剂盒，包括人副流感病毒4型核酸反应液，所述反应液包括反应缓冲液、脱氧核糖核普三磷酸、用于靶多核普酸扩增的两对上、下游引物以及用于靶多核普酸检测的两条探针；其序列分别为SEQ ID NO：1~6。本发明试剂盒操作快速，方法简便，检测的特异性好、灵敏度高且检测范围宽；采用本试剂盒可对未知样本中的人副流感病毒4型a和b两个不同亚型核酸进行快速检测，为诊断人副流感病毒4型a和b两个不同亚型核酸提供可靠的实验依据，彻底解决了现有技术中试剂盒检测效率低、特异性差以及灵敏度低的问题。

技术领域

本发明涉及核酸检测技术，尤其是涉及一种人副流感病毒4型核酸检测试剂盒。

背景技术

急性呼吸道感染（acute respiratory tract infection，ARTI）是儿童发病和死亡的常见原因，严重威胁儿童的健康，大量文献报道人副流感病毒（human parainfluenzavirus，HPIV）是儿童的重要病原，有资料显示大约30%-40%婴幼儿的病毒性呼吸道感染是由该类病毒引起。HPIV在ARTI的病毒病原中仅次于最常见的呼吸道合胞病毒。另有血清学流调资料证实，绝大多数6-10岁的儿童曾感染过HPIV。HPIV根据遗传学和抗原构造的不同分为1、2、3、4型。HPIV1型和HPIV3型属于副粘病毒亚科呼吸病毒属，HPIV2型和HPIV4型属于副粘病毒亚科病毒属。四型中的HPIV1、2、3是儿童ARTI的常见病原体，而HPIV4（根据抗原的不同又被分为a和b两个亚型）却被认为很少见。但是新近的研究结果表明，HPIV4作为病原体的地位被明显低估。

HPIV4是1958年从美国一名无热性上呼吸道疾病患者咽拭子中分离鉴定出来的。以往认为引起的疾病轻微而未引起人们足够的重视，故临床上也很少采用其它的方法来检测，但近年有血清学流调资料显示，在所有呼吸道感染患者中HPIV4抗体阳性约占3%，而儿童和青少年却高达50-90%。

荧光定量聚合酶链式反应，是在普通的反应体系中加入荧光基团，在把序列扩增过程中，随着反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加，荧光信号不断增强，并逐渐累积形成一条扩增曲线，通过荧光积累曲线实时监测整个进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定性及定量分析的方法。目前在real-time Q-PCR方法中最广泛使用的为Taqman系统。扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核普酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团，此时5’端荧光基团吸收能量后将能量转移给临近的3’端荧光淬灭基团发生荧光共振能量转移，因此探针完整时，检测不到该探针5’端荧光基团发出的荧光。但在扩增中，溶液中的模板变性后低温退火时，引物与探针同时与模板结合。在引物的介导下，沿模板向前延伸至探针结合处，发生链的置换，Taq酶的5’一3’外切酶活性将探针5’端连接的荧光基团从探针上切割下来，游离于反应体系中，从而脱离3’端荧光淬灭基团的屏蔽，接受光刺激发出荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

目前的对人副流感病毒4型的检测方法主要有以下几种：（1）病毒分离：为病毒学诊断的金标准，但费时、费力，且敏感性不高，不适宜临床检测需要。（2）抗原检测：采用免疫荧光技术检测的抗原，具有早期、快速检测的优点，但因所用抗体的差异，即使釆用特异性高的单克隆抗体，对一些变异的毒株也难以检出。（3）抗体检测：运用放射免疫或酵联免疫吸附技术检测血清抗体能间接反映机体感染HPIV4，但受抗体出现时相、机体免疫状况等多方面的影响，且还存在反复感染的可能，使得结果的评价存在一定的局限性。

因此，亟需一种灵敏度高，特异性强，覆盖面广，检测窗口期短的人副流感病毒4型检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人副流感病毒4型核酸检测试剂盒，以解决现有技术中试剂盒灵敏度低，特异性差的技术问题。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：