[发明专利]一种高密度发酵表达重组轮状病毒ΔVP8*抗原的培养方法

权利要求书

1.一种高密度发酵表达重组轮状病毒ΔVP8*抗原的培养方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)种子活化：将重组蛋白大肠杆菌工程菌接入培养基中活化；所述的种子活化具体为：将重组蛋白大肠杆菌工程菌按体积百分比1％的接种量接入培养基中；于37℃，150～220rpm摇床中培养过夜；

(2)接种种子罐：再将步骤(1)所得活化后的菌液接种种子罐培养至OD₆₀₀≥4；

(3)移种发酵罐培养：将种子罐中所有菌液转移至50L发酵罐，温度37℃，通空气并搅拌，维持溶氧在30％以上，培养至OD₆₀₀≥4；

(4)流加补料培养：按照3.5mL/min的速度起始，每小时递增3.5mL/min的速度，缓慢流加25％的葡萄糖，继续维持上述条件培养；

(5)诱导表达：培养至OD₆₀₀≥30，停止补葡萄糖，30min后，流加诱导培养基，按照10mL/min的速度起始，约30min后降温至18℃，添加0.5mM IPTG，每3h递增7mL/min的速度持续流加诱导培养基；诱导12h，停止培养；所述的诱导培养基为：大豆蛋白胨48g/L、酵母提取物96g/L、甘油20％、二水合磷酸二氢钠2.21g/L、十二水合磷酸氢二钠28.65g/L；

(6)离心收菌、破碎澄清，收集澄清后的液体即为重组轮状病毒ΔVP8*抗原的蛋白原液；

所述的破碎澄清为用pH8.5的50mM Tris-HCl重悬菌体，高压均质机800-1000psi破碎菌体，用中空纤维柱澄清，收集澄清后的液体即为重组轮状病毒ΔVP8*抗原的蛋白原液。

2.根据权利要求1所述的高密度发酵表达重组轮状病毒ΔVP8*抗原的培养方法，其特征在于：步骤(1)所述的培养基为：大豆蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L、硫酸卡那霉素100μg/mL。

3.根据权利要求1所述的高密度发酵表达重组轮状病毒ΔVP8*抗原的培养方法，其特征在于：步骤(2)所述的接种种子罐为：按体积百分比3％的接种量接种10L种子罐，37℃，通空气并搅拌，维持溶氧在30％以上，培养至OD₆₀₀≥4。

4.根据权利要求1或3所述的高密度发酵表达重组轮状病毒ΔVP8*抗原的培养方法，其特征在于：步骤(2)所述的培养基为5L：大豆蛋白胨12g/L、酵母提取物24g/L、二水合磷酸二氢钠2.21g/L、十二水合磷酸氢二钠28.65g/L、硫酸卡那霉素100μg/mL。

5.根据权利要求1所述的高密度发酵表达重组轮状病毒ΔVP8*抗原的培养方法，其特征在于：步骤(3)所述的培养基为25L：大豆蛋白胨12g/L、酵母提取物24g/L、二水合磷酸二氢钠2.21g/L、十二水合磷酸氢二钠28.65g/L。

6.根据权利要求1所述的高密度发酵表达重组轮状病毒ΔVP8*抗原的培养方法，其特征在于：所述的离心收菌为6000r/min，离心10min，收获菌体。