[发明专利]具有高耐盐性和油脂降解率的微生物菌剂及其制备方法

权利要求书

1.一种具有高耐盐性和油脂降解率的微生物菌剂，其特征在于，由枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、植物乳酸菌、酿酒酵母、巨大芽胞杆菌、白浅灰链霉菌以及米曲霉组成，所述微生物菌剂中各成分的浓度为：枯草芽孢杆菌，4.0×10⁹～1.0×10¹⁰cfu/mL；解淀粉芽孢杆菌，4.0×10⁹～1.0×10¹⁰cfu/mL；植物乳酸菌，1.0×10⁹～5.0×10⁹cfu/mL；酿酒酵母，5.0×10⁸～1.0×10⁹cfu/mL；巨大芽胞杆菌，1.0×10⁹～5.0×10⁹cfu/mL；白浅灰链霉菌，5.0×10⁸～1.0×10⁹cfu/mL；米曲霉，5.0×10⁸～1.0×10⁹cfu/mL。

2.一种根据权利要求1所述的具有高耐盐性和油脂降解率的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、提供菌种原料和培养基，所述菌种原料由枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、植物乳酸菌、酿酒酵母、巨大芽胞杆菌、白浅灰链霉菌以及米曲霉组成；

S2、斜面培养：在无菌条件下，将所述菌种原料接种于固体培养基中，在25-35℃下培养1-3天；

S3、一级种子培养：在无菌条件下，将S2中培养好的菌种接种于液体培养基中，在25-35℃下培养1-3天，当菌种液体培养OD600值为3.0-4.0时停止培养，得到一级种子液；

S4、二级种子培养：在无菌条件下，将所述一级种子液分别接种于装有对应液体培养基的锥形瓶中，在25-35℃下培养1-3天，当菌种液体培养OD600值为3.0-4.0时停止培养，得到二级种子液；

S5、混合发酵培养：在无菌条件下，先将步骤S4中植物乳酸菌、酿酒酵母、巨大芽胞杆菌、白浅灰链霉菌、米曲霉的二级种子液接种于发酵培养基进行培养，再接种枯草芽孢杆菌的二级种子液进行培养，最后接种解淀粉芽孢杆菌的二级种子液进行培养，得到所述微生物菌剂。

3.如权利要求2所述的具有高耐盐性和油脂降解率的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述固体培养基包括牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基以及乳酸细菌固体培养基；所述液体培养基包括牛肉膏蛋白胨液体培养基、马铃薯葡萄糖液体培养基以及乳酸细菌液体培养基；所述发酵培养基为：糖蜜3％、玉米浆粉8％、硫酸镁0.2％、氢氧化钠0.15％、磷酸氢二钾0.1％、磷酸二氢钾0.1％，余量为水。

4.如权利要求3所述的具有高耐盐性和油脂降解率的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤S2中，具体包括以下步骤：

在无菌条件下，将所述枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和巨大芽胞杆菌接种于所述牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中进行培养，将所述植物乳酸菌接种于所述乳酸细菌固体培养基中进行培养，将所述酿酒酵母、白浅灰链霉菌和米曲霉接种于所述马铃薯葡萄糖琼脂培养基中进行培养；其中，将所述植物乳酸菌、酿酒酵母、巨大芽胞杆菌、白浅灰链霉菌、米曲霉于25～35℃条件下培养2-3天，将所述枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌于25～35℃条件下培养1-2天。

5.如权利要求3所述的具有高耐盐性和油脂降解率的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤S3中，具体包括以下步骤：

在无菌条件下，将步骤S2中培养好的枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和巨大芽胞杆菌接种于所述牛肉膏蛋白胨液体培养基中进行培养，将培养好的植物乳酸菌接种于所述乳酸细菌液体培养基中进行培养，将培养好的酿酒酵母、白浅灰链霉菌和米曲霉接种于所述马铃薯葡萄糖液体培养基中进行培养；其中，将植物乳酸菌、酿酒酵母、巨大芽胞杆菌、白浅灰链霉菌、米曲霉在25～35℃条件下，160r/min摇床培养2～3天，将枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌在25～35℃条件下，130r/min摇床培养1～2天，当菌种液体培养OD600值为3.0-4.0时停止培养，制得所述一级种子液。