[发明专利]病毒重组糖蛋白及其真核细胞高效表达方法与应用

说明书

本发明提供一种病毒重组糖蛋白，其是用人或动物分泌性蛋白的信号肽替代目标病毒糖蛋白的信号肽而形成的重组糖蛋白。本发明还提供利用真核细胞高效表达所述重组糖蛋白的方法。本发明解决了病毒重组糖蛋白在真核细胞中表达量低、分泌差的世界技术难题，为开发疫苗和病毒保护性抗体检测试剂奠定坚实的基础，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体地说，涉及一种病毒重组糖蛋白及其真核细胞高效表达方法与应用。

背景技术

狂犬病是我国法定报告管理的乙类传染病，是迄今为止人类死亡率最高的急性传染病之一，其病原是狂犬病毒(Rabies virus)，人和所有温血动物对该病毒均易感。狂犬病的致死率接近100％，虽然人源抗狂犬病毒抗体药近年来有了很大的发展，但是目前仍然没有开发出非常有效的治疗性药物，因此，狂犬疫苗仍然是目前防治狂犬病的最有效的手段。

狂犬病毒基因组为不分节段的单股负链RNA，全长约12kb，分别编码酶蛋白(L)、糖蛋白(G)、基质蛋白(M)、磷酸化蛋白(P)、核蛋白(N)五个主要结构蛋白。其中，G蛋白含有多个保护性抗原位点，能够诱导产生抗狂犬病毒保护性抗体。

世界卫生组织(WHO)推荐的狂犬病暴露后预防措施，对狂犬病三级暴露后的预防主要是采用狂犬疫苗注射结合抗狂犬病毒免疫球蛋白的方法。为了提高疫苗的安全性，重组乙肝疫苗、重组人乳头状病毒疫苗纷纷上市。但是，狂犬病毒重组糖蛋白真核表达量太低，原核表达蛋白构象不对，重组狂犬疫苗的研究一直没有进展。普遍使用的人用狂犬疫苗仍然为灭活疫苗，存在一定的安全风险。

另外，由于不同的厂家使用的病毒株不同，病毒表达宿主不同，生产工艺不同，质量也参差不齐，直接影响到狂犬病的防治。目前普遍采用抑制病毒感染细胞的实验来进行疫苗有效性评价，费时费力。用重组狂犬G蛋白包板开发出ELISA间接法试剂盒检测狂犬保护性抗体滴度，简便、准确、重复性高，对提高我国狂犬疫苗质量具有很大的社会效益。

发明内容

本发明的目的是提供病毒重组糖蛋白及其真核细胞高效表达方法。

本发明的另一目的是提供病毒重组糖蛋白的各种用途。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供的病毒重组糖蛋白，其是用人或动物分泌性蛋白的信号肽替代目标病毒糖蛋白的信号肽而形成的重组蛋白。

任选可以在本发明病毒重组糖蛋白的N端和/或C端连接His标签、柔性Linker。

本发明所述人或动物分泌性蛋白的信号肽包括但不限于人抗体IgG重链和/或人白蛋白的信号肽。

本发明所述目标病毒糖蛋白包括但不限于狂犬病毒G蛋白、埃博拉病毒GP1蛋白。

第二方面，本发明提供一种狂犬病毒重组糖蛋白，其是用人IgG蛋白重链的信号肽替代狂犬病毒G蛋白的信号肽而形成的重组糖蛋白，所述重组糖蛋白的氨基酸序列如SEQID NO:1所示。

第三方面，本发明提供一种埃博拉病毒重组糖蛋白，其是用人白蛋白的信号肽替代埃博拉病毒GP1蛋白的信号肽而形成的重组糖蛋白，所述重组糖蛋白的氨基酸序列如SEQID NO:3所示。

第四方面，本发明提供编码所述重组糖蛋白的核酸。

第五方面，本发明提供含有所述核酸的生物材料，所述生物材料为表达盒、表达载体、克隆载体、工程菌或宿主细胞等。

第六方面，本发明提供利用真核细胞高效表达所述重组糖蛋白的方法，包括以下步骤：

1)根据已知的蛋白序列，通过密码子对应关系和宿主表达频率，利用PCR方法、DNA重组法或人工合成的方法，获得并优化编码权利要求1-4任一项所述重组糖蛋白的核酸；