[发明专利]一种用于区分甘蓝品种的InDel引物及其应用

说明书

本发明公开了一种用于区分甘蓝品种的InDel引物，属于分子生物学分子标记领域。该方法通过设计筛选出的5对InDel引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1～5所示，用于扩增未知甘蓝品种的DNA，通过统计凝胶电泳后的谱带，区分出具有唯一特异性谱带的品种，并建立被区分品种的树形鉴别图。本发明的引物提高了InDel反应的稳定性，操作简便，高效准确，节省引物，仅通过5次PCR就可轻松的将“QB1”等36个甘蓝品种在分子水平上进行快速区分，所得到的品种鉴定图比聚类树更具有直观性，即根据品种鉴定图就可以快速找出能区分任意两个品种的引物，该方法可以实现甘蓝种苗早期鉴定，在其他物种上也具有广泛的通用性。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种利用InDel分子标记技术快速区分甘蓝品种的方法。

背景技术

甘蓝为世界广泛种植的主要蔬菜作物之一，其栽培历史悠久，品种资源及其丰富，目前我国结球甘蓝每年种植面积在40万公顷以上，占全国蔬菜种植面积的25％～30％，是东北、西北、华北等地区春、夏、秋季栽培的主要蔬菜，在南方也有大积栽培。近些年来，随着我国甘蓝产量及栽培面积的大幅度扩展，越来越多的优良品种应用于甘蓝生产中。因此，建立甘蓝品种快速可靠的鉴定技术体系对于甘蓝品种遗传资源的研究保护、苗期鉴定、品种区分乃至甘蓝产业的持续发展等具有重要的意义。

DNA分子标记是随着分子克隆和重组DNA等生物技术迅速发展而产生的一类遗传标记，由于其直接建立在分子水平上，而不受外界环境、作物发育阶段、取样部位等因素影响，其检出的多态性位点是无限的，故鉴定结果具有高度的可靠性，且重复性高，鉴别力强。

由于目前传统单一的形态学品种鉴定方法已无法满足有效鉴别或区分当今日益增多的品种的要求。分子标记的应用给作物遗传育种研究带来了巨大变化，同时也应用到了品种鉴定的研究中。与传统的DNA标记如RAPD、ISSR、SRAP和AFLP等众多分子标记技术不同，InDel标记为基于全基因组DNA序列开发的新一代分子标记技术， InDel多态性是基因组中一种特殊类型的二等位基因遗传标记，表现为基因组中插入或缺失了不同大小的小片段序列，属于共显性标记，因其具有较好的稳定性和多态性等优点目前已被普遍应用于指纹图谱构建、种质资源的遗传基础研究、基因的快速定位、高密度基因连锁标记、遗传多样性分析，品种分类研究等方面。

现有的利用分子标记技术在进行蔬菜作物品种区分与种质鉴定的研究工作中，多采用计算机软件绘制数字化指纹图谱并结合统计学软件聚类分析得出聚类树，但是此聚类分析结果不但无法直观显示出区分品种的引物，无法显示鉴别过程，其操作量大，缺乏实用性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用于用于区分甘蓝品种的InDel引物。

本发明还要解决的技术问题是提供上述引物在区分甘蓝品种中的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种用于区分甘蓝品种的InDel引物，包括如下引物：

InDel22：F：aacacctgaaaccctcac；r：tttgaaagtcacccgtaa

InDel 24：F：actcctcccaacggtctt；r：gaacaggtggcacaagat

InDel 5：F：ttttggaaacggtcttgt；r：agcgactgaatggcaccc

InDel 3：F：aagcaaatgagcagaatga；r：tttgggctgtttaggtgg

InDel 34：F：tgggtcagttgtccaaag；r：tcagtacgcatatcagcac。

上述用于区分甘蓝品种的InDel引物在区分甘蓝品种中的应用。