[发明专利]一种用于区分甘蓝品种的InDel引物及其应用

权利要求书

1.一种用于区分甘蓝品种的InDel引物，其特征在于，包括如下引物：

InDel22：F：aacacctgaaaccctcac；r：tttgaaagtcacccgtaa

InDel 24：F：actcctcccaacggtctt；r：gaacaggtggcacaagat

InDel 5：F：ttttggaaacggtcttgt；r：agcgactgaatggcaccc

InDel 3：F：aagcaaatgagcagaatga；r：tttgggctgtttaggtgg

InDel 34：F：tgggtcagttgtccaaag；r：tcagtacgcatatcagcac。

2.权利要求1所述的用于区分甘蓝品种的InDel引物在区分甘蓝品种中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的甘蓝品种包括：QB1、QB2、QB3、QB7、QB10、QB12、QB13、QB18、QB19、QB23、QB28、QB30、QB37、QB39、QB40、QB41、QB43、QB46、QB90、QB100、QB103、QB107、QB111、QB120、QB121、QB168、QB171、QB185、QB 410、QB JF、QBYSGL、QB142、QB161、QB179、QB158、QB197。

4.根据权利要求2所述的应用，其特证在于，包括如下步骤：

(1)提取甘蓝叶片基因组DNA；

(2)利用InDel22引物对步骤(1)得到的基因组DNA进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在400bp处出现特征性谱带，而在280bp无特征性谱带；利用InDel24引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在280bp处出现特征性谱带，而在450bp处无特征性谱带；继续利用InDel5引物进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在100bp、150bp、350bp处均出现特征性谱带，再利用InDel3引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在450bp处出现特征性谱带，其品种为QB2，若在400bp处出现特征性谱带，其品种为QB28，若在500bp处出现特征性谱带，其品种为QB107；

利用InDel24引物进行InDel扩增时，若在280bp、450bp处均出现特征性谱带；继续利用InDel5引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在350bp处出现特征性谱带，而在100bp、150bp均没有出现特征性谱带，其品种为QB1，若在100bp、150bp、350bp处均出现特征性谱带，再利用InDel3引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在300bp、450bp处出现特征性谱带，其品种为QB18，若在300bp、600bp处出现特征性谱带，其品种为QB111；

(3)利用InDel22引物对步骤(1)得到的基因组DNA进行InDel扩增，若在280bp处出现特征性谱带，而在400bp无特征性谱带；利用InDel24引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在280bp处出现特征性谱带，而在450bp处无特征性谱带；继续利用InDel5引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在100bp、350bp处均出现特征性谱带，其品种为QB197；若在350bp处无特征性谱带，而在400bp出现特征性谱带，其品种为QBQ168；若在100bp处无特征性谱带，该品种为QB120；若在400bp、350bp处均出现特征性谱带，该品种为QB90；若在450bp处出现特征性谱带，该品种为QB171；若在100bp、150bp、300bp处均出现特征性谱带，继续利用InDel3引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；若在300bp、500bp处均出现特征性谱带，其品种为QB43；若在480bp处出现特征性谱带，其品种为QB41；若在300bp、400bp处均出现特征性谱带，其品种为QB13；若在400bp、450bp处均出现特征性谱带，利用InDel34引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在100bp处出现特征性谱带，其品种为QB12；若在100bp处无特征性谱带，其品种为QB103；

利用InDel22引物对步骤(1)得到的基因组DNA进行InDel扩增，若在280bp处出现特征性谱带，而在400bp无特征性谱带；利用InDel24引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在280bp、450bp处均出现特征性谱带；继续利用InDel5引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在350bp、450bp、处均出现特征性谱带，其品种为QB179；若在350bp处出现特征性谱带，其品种为QB161；若在100bp处无特征性谱带，而在150bp、350bp处有特征性谱带，该品种为QB46；若在400bp处出现特征性谱带，该品种为QB30；若在100bp、150bp、350bp处均出现特征性谱带，继续利用InDel3引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；若在600bp、300bp处均出现特征性谱带，其品种为QB3；若在480bp、500bp处出现特征性谱带，其品种为QB39；若在300bp、450bp处均出现特征性谱带，利用InDel34引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在400bp处出现特征性谱带，其品种为QB19；若在400bp处无特征性谱带，其品种为QB121；若在300bp、500bp处均无特征性谱带，利用InDel34引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若420bp处出现特征性谱带其品种为QB410；若420bp处未出现特征性谱带其品种为QB142；

(4)利用InDel22引物对步骤(1)得到的基因组DNA进行InDel扩增，若在280bp、400bp处均出现特征性谱带；利用InDel24引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在280bp处出现特征性谱带，而在450bp处无特征性谱带；继续利用InDel5引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在400bp处出现特征性条带，其品种为QB37；若在100bp、150bp、350bp处均出现特征性谱带，利用InDel3引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在300bp处出现特征性谱带，其品种为QB10；若在250bp处出现特征性谱带，其品种为QB40；若在400bp、450bp处均出现特征性谱带，其品种为QBJF；

利用InDel22引物对步骤(1)得到的基因组DNA进行InDel扩增，若在280bp、400bp处出现特征性谱带；利用InDel24引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在280bp、450bp处均出现特征性谱带；继续利用InDel5引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在100bp处无特征性谱带，而在150bp、300bp处出现特征性谱带，其品种为QB100；若在350bp处无特征性谱带，而在400bp处出现特征性谱带，其品种为QB185；若在100bp、150bp、350bp处均出现特征性谱带，利用InDel3引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；若在300bp处出现特征性谱带，其品种为QB7；若在300bp、450bp处均出现特征性谱带，其品种为QB23；若在350bp、400bp处均出现特征性谱带，利用InDel3引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若在250bp、300bp、400bp处均出现特征性谱带，利用InDel34引物继续进行InDel扩增，得到的PCR产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；若在250处出现特征性谱带其品种为QBYSGL；若在250处未出现特征性谱带其品种为QB158。