[发明专利]一种发酵乳制品中嗜热链球菌实时荧光定量PCR引物对及其应用在审
| 申请号： | 201810935358.1 | 申请日： | 2018-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN108893549A | 公开（公告）日： | 2018-11-27 |
| 发明（设计）人： | 朱成龙;苏真真;杨博岩;杨燕;高丽鹤;甘玉迪 | 申请（专利权）人： | 山东探克生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/46 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人： | 陈桂玲 |
| 地址： | 250101 山东省济南市*** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 实时荧光定量PCR 发酵乳制品 嗜热链球菌 引物 上游引物 下游引物 应用 核苷酸序列 传统检测 定量检测 苷酸序列 益生菌 省时 省力 定性 检测 | ||
1.一种发酵乳制品中嗜热链球菌实时荧光定量PCR引物对，包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
其中，所述引物对是根据嗜热链球菌16S RNA的保守序列片段进行设计和筛选，该引物对的扩增片段长度为190bp。
2.权利要求1所述的引物对在发酵乳制品中嗜热链球菌实时荧光定量PCR检测中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述发酵乳制品中嗜热链球菌实时荧光定量PCR检测，步骤如下：
(1)提取发酵乳制品中的总RNA，将提取的总RNA进行反转录，得cDNA，-20℃保存；
(2)以步骤(1)中的cDNA为模板，利用权利要求1所述的嗜热链球菌实时荧光定量PCR引物对，进行实时荧光定量PCR；
(3)通过Ct值对发酵乳制品中嗜热链球菌进行定性判定，若Ct值≤35，则为阳性，认为发酵乳制品中含有嗜热链球菌，否则，为阴性，认为发酵乳制品中不含嗜热链球菌；并通过标准曲线对发酵乳制品中嗜热链球菌进行定量检测。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述总RNA采用Trizol法提取。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(3)中，所述实时荧光定量PCR的反应体系：1.0μL cDNA模板、0.5μL浓度为10μM的上游引物、0.5μL浓度为10μM的下游引物、10μL 2×SYBR premix Ex taqTM、8μL ddH2O，总计20μL。
6.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(3)中，所述实时荧光定量PCR的反应体系：95℃预变性10min；95℃变性10s，58℃退火45s，共45个循环。
7.一种嗜热链球菌定性、定量检测试剂盒，包括权利要求1所述的发酵乳制品中嗜热链球菌实时荧光定量PCR引物对。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于山东探克生物科技股份有限公司，未经山东探克生物科技股份有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810935358.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
