[发明专利]一种PSR检测耐甲氧西林金葡菌的引物、试剂盒与方法

说明书

本发明公开了一种PSR检测耐甲氧西林金葡菌的引物、试剂盒与方法。本发明提供了如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.4所示的PSR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的引物，通过检测特异性靶序列femA及mecA，实现了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的特异、灵敏和可靠的检测。本发明基于所述的引物，还提供PSR检测耐甲氧西林金葡菌的试剂盒与检测方法，所述的方法具有灵敏度高、特异性好，操作简便快速，结果准确可靠，检测成本低，适合现场检测应用的特点，无需特殊、昂贵的仪器和试剂，直接用荧光染料显色可凭肉眼判断结果，特别适用中小型单位及现场检测，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种PSR检测耐甲氧西林金葡菌的引物、试剂盒与方法。

背景技术

金黄色葡萄球菌是医院和社区感染的重要致病菌，近年来随着广谱抗菌药的广泛使用，金黄色葡萄球菌的耐药性在逐渐升高，其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Meticillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA)分离率日趋升高，MRSA不仅对甲氧西林耐药，还对多种抗生素耐药，具有多重耐药特性，已是临床抗感染化疗的难题之一。因此，快速、准确的检测MRSA菌株，不仅可以指导临床选择合适的抗生素，还有利于控制MRSA的传播。

目前对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测方法主要有传统的纸片法，以及分子生物技术的PCR方法，还有以免疫学为主的酶联免疫试剂盒和应用各类生化自动鉴定仪的检测方法，以及最新出现的基因芯片检测手段。常规检测鉴定方法工作量相对较大，且检测结果一般4～5天才能得出结果，耗时长，根据实验现象判断鉴定结果，很难满足快速鉴定的需要。近年发展起来的基因芯片检测及PCR扩增方法具有较强的特异性、快速、灵敏，但是成本较高。免疫学检测方法，如ELISA，免疫层析等，灵敏度高，但是操作过程复杂，成本偏高，不宜于大规模检测样品。目前应用最广泛的恒温扩增技术-LAMP也有它的局限性，如引物设计复杂、假阳性率高、试剂价高偏高，且由于日本知识产权的保护，我国在转化应用上局限性强。聚合酶螺旋反应(Polymerase Spiral Reaction,PSR)技术与其他核酸扩增技术相比，可以在等温条件下快速、高效、特异地扩增靶序列，且操作简便，不需要精准的变温设备，成本较低，在食源性微生物检测领域显示出广阔的发展前景。

要实现有效地利用PSR技术，合适的引物设计是研发关键；同时，由于PSR一般通过显色直接进行结果判读，显色体系对于整个PSR扩增反应结果判读具有重要的影响，而在本领域的研发实践中如何通过简单的显色实现准确、快速的结果判读也是目前亟需攻克的技术难题。

因此，建立一种针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌新型的具有独立知识产权的等温核酸扩增方法具有重要的意义。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种PSR等温扩增反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的引物。

本发明的另一目的在于提供一种PSR等温扩增反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的试剂盒。

本发明的又一目的在于提供一种PSR等温扩增反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法。该方法具有灵敏度高、特异性好，操作简便快速，结果准确可靠，检测成本低，适合现场检测应用的特点。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一组PSR等温扩增反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的两个靶点femA及mecA的引物，包括检测引物Ft和检测引物Bt，其核苷酸序列如下所示：

靶点femA检测引物Ft:

5’-AGGTATAGACTTCGATGTTTCAAATCGCGGTCCAGTG-3’(SEQ ID NO.1)；

靶点femA检测引物Bt：