[发明专利]一种干细胞培养基及其制备方法

说明书

本发明公开了一种干细胞培养基及其制备方法，属于细胞培养技术领域，所述培养基包括基础培养基和添加剂，向所述基础培养基中添加的各添加剂及其浓度为：原花青素8‑10mg/mL、胆甾烯基豆蔻酸酯5‑10mg/mL、人参皂苷0.1‑0.5mg/mL、转铁蛋白0.1‑0.2mg/mL、人表皮细胞生长因子微球1.5×10^‑3‑2×10^‑3mg/mL、成纤维细胞生长因子微球1.5×10^‑3‑2×10^‑3mg/mL、棕榈酸0.7×10^‑3‑1.2×10^‑3mg/mL、胰岛素2×10^‑3‑6×10^‑3mg/mL、贻贝粘蛋白2×10^‑5‑4×10^‑5mg/mL，本发明的培养基不含动物血清，通过微球缓释作用使细胞平稳扩增。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种干细胞培养基及其制备方法。

背景技术

干细胞是一种具有自我复制能力，并且在一定条件下可以分化成多种功能细胞的多潜能细胞，因此干细胞在疾病治疗领域具有至关重要的作用，但是干细胞在正常成体组织中含量较低，需要在体外进行扩增和培养，因此如何在体外快速扩增与培养干细胞是干细胞治疗疾病的重要环节。

目前用于培养干细胞的培养基中一般都要加入胎牛血清，用于支持细胞生长、执行细胞的功能，但是由于血清组分不确定，并且含有大量成分复杂的蛋白质，给细胞培养的批次化、标准化带来困难，其次含动物血清的培养基无法规避动物血清中的异源体，并且容易诱导细胞分化，从而给细胞培养表达产品分离纯化和结果的重复性带来困难。

发明内容

针对上述背景，本发明旨在提供一种不含有动物血清的干细胞培养基，为了解决现有技术中存在的问题，本发明还提供干细胞培养基的制备方法。

本发明采用的技术方案是：一种干细胞培养基，包括基础培养基和添加剂，向所述基础培养基中添加的各添加剂及其浓度为：原花青素8-10mg/mL、胆甾烯基豆蔻酸酯5-10mg/mL、人参皂苷0.1-0.5mg/mL、转铁蛋白0.1-0.2mg/mL、人表皮细胞生长因子微球1.5×10^-3-2×10^-3mg/mL、成纤维细胞生长因子微球1.5×10^-3-2×10^-3mg/mL、棕榈酸0.7×10^-3-1.2×10^-3mg/mL、胰岛素2×10^-3-6×10^-3mg/mL、贻贝粘蛋白2×10^-5-4×10^-5mg/mL，所述人表皮细胞生长因子微球中人表皮细胞生长因子的负载量为6.72-7.15mg/g，所述成纤维细胞生长因子微球中成纤维细胞生长因子的负载量为6.45-7.02mg/g，所述基础培养基为DMEM/F12液体培养基。

优选地，所述人表皮细胞生长因子微球EGF-壳聚糖缓释微球，所述成纤维细胞生长因子微球为FGF-壳聚糖缓释微球，通过壳聚糖微球负载包覆细胞生长因子，一方面可以提高细胞生长因子对酸、热的稳定性，另一发面通过缓释微球可以使细胞生长因子在培养基中持续、平稳地释放，使细胞平稳扩增；其次，壳聚糖分子中带有游离氨基，在弱酸中溶解后呈阳离子性质，因此有助于细胞粘附生长。

本发明中加入的人表皮细胞生长因子微球和成纤维细胞生长因子微球主要用于促进干细胞的生长分裂，原花青素可以清楚自由基对细胞的伤害，胆甾烯基豆蔻酸酯、人参皂苷可以促进干细胞的增殖，转铁蛋白能够调节体内铁元素的代谢，且能与其他微量元素结合来调节干细胞的生长增殖，胰岛素能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸的效率，从而加速蛋白质、脂肪酸等的合成，贻贝粘蛋白有助于细胞贴壁生长。

本发明还提供了上述干细胞培养基的制备方法，主要包括以下步骤：