[发明专利]一种无血清细胞培养基及其用途

说明书

本发明公开了一种无血清细胞培养基，包含以下组分：基础培养基、NaHCO₃、L型植物血球凝集素、复合氨基酸、柠檬酸铁、重组人胰岛素和抗氧化剂。本发明还公开了所述无血清细胞培养基在培养外周血淋巴细胞中的用途。本发明无血清细胞培养基中添加了抗氧化剂，可用于培养外周血淋巴细胞，尤其是离心管静置培养的外周血淋巴细胞，能显著改进离心管装培养基的培养效果，满足现有临床检测对离心管培养基的要求。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种无血清细胞培养基及其用途。

背景技术

近年来，外周血染色体核型检查分析有向第三方检测平台集中的趋势。规模化、自动化的细胞染色体制片技术已在第三方检测平台出现，以适应不断增加的检验样本。而用离心管装培养基进行培养省去了传统的西林瓶培养后液体转移至离心管进行细胞染色体制片的步骤，避免了出错和交叉污染的可能，适合外周血的自动化、规模化细胞制片的发展趋势。

现市场上用离心管装的淋巴细胞培养基和传统的西林瓶装培养基在配方上并无区别，仅仅是从西林瓶到离心管之间剂型的替代。虽然细胞培养基配方未发生改变，但综合临床单位调研结果和实际试配检测的结果却表明，现有的用于核型分析的西林瓶装的培养基公开配方，无论是传统的含血清培养基还是无血清培养基，直接用于离心管培养的效果都显著不如西林瓶装的培养效果，在细胞转化率或分裂相指数等质量指标方面达不到临床单位要求。

一般认为离心管培养基效果不理想的原因主要为：为了便于在细胞培养后原位进行细胞固定和染色体制备，采用的离心管规格一般为15ML底部锥型的刻度离心管。与西林瓶相对较大的底面积相比，在这种离心管培养时的细胞会沉积在锥型管底有限的空间。由于细胞堆积成团，障碍了培养基中营养物质的传质和吸收，最终抑制了细胞的增殖。相应的改进的措施是将离心管横卧的方式(锥型管底最低点至管盖中心的沿长线与水平面呈0-15度夹角)进行培养，通过横卧的方式增加沉降后的细胞接触管壁的面积，以减少细胞堆积的程度；或采取培养过程中一定间隔或持续震荡混匀的方式避免细胞堆积于管底。我们研究发现，离心管横卧培养相比离心管垂直培养可一定程度改进效果，但细胞转化率和分裂相指数仍低于西林瓶装培养基的培养效果，达不到临床检测单位的要求。而间隔或持续摇匀虽可显著改善离心管细胞培养效果，但却增加了临床检测单位人手操作负担(特别是样本处理量大时)或额外的设备负担。上述离心管培养基的效果方面的因素或使用缺陷障碍了离心管培养基代替西林瓶培养基在临床单位的使用。

针对上述问题，有必要开发一种用于离心管静置培养的外周血淋巴细胞培养基，并且培养效果不低于现有西林瓶装培养基的水平。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种无血清细胞培养基，其可用于培养外周血淋巴细胞，尤其是离心管静置培养的外周血淋巴细胞，能显著改进离心管装培养基的培养效果，满足现有临床检测对离心管培养基的要求。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种无血清细胞培养基，包含以下组分：基础培养基、NaHCO₃、L型植物血球凝集素、复合氨基酸、柠檬酸铁、重组人胰岛素和抗氧化剂。

优选地，所述抗氧化剂包含维生素E和还原型谷胱甘肽。

优选地，所述无血清细胞培养基包含以下浓度的组分：基础培养基9～12g/L、NaHCO₃ 1～3g/L、L型植物血球凝集素8～13mg/L、复合氨基酸18.5～21.5ml/L、柠檬酸铁0.8～1.2mg/L、重组人胰岛素8.5～11mg/L、维生素E 0.8～1.2mg/L和还原型谷胱甘肽4～6mg/L。