[发明专利]一种枸杞炭疽病抗性评价方法

权利要求书

1.一种枸杞炭疽病抗性评价方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)叶片采集：采集生长部位相当、大小基本一致且无病虫的枸杞叶片；

2)炭疽病菌培养：将保存的枸杞炭疽病菌株，在超净工作台接种于PDA固体平板，该PDA固体平板包括马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂15克，并且加蒸馏水定容至1000毫升后高压蒸汽灭菌，于28±1℃培养；

3)孢子悬液制备：将生长5-7天的菌落划块接种于液体PDA培养基，该液体PDA培养基包括马铃薯200克，葡萄糖20克，并且加蒸馏水定容至1000毫升后高压蒸汽灭菌，震荡培养5-7天，离心，计数，用灭菌蒸馏水稀释至所需浓度，具体为10⁶个孢子/ml、10⁷个孢子/ml、10⁸个孢子/ml，得到孢子悬液，备用；

4)炭疽病菌接种：将枸杞叶片进行表面消毒并清洗后，将叶片置于灭菌培养皿，用灭菌手术刀刀尖在叶片叶脉两侧划2mm伤口，伤口处分别接种10μL配置好的孢子悬液，并进行培养；

5)枸杞离体叶片接种后病情调查及统计：于25℃、12h光照/12h黑暗、湿度80％条件培养4天后测量病斑直径，将直径大小作为衡量病害严重程度的评价指标；

6)根据分级标准将枸杞材料的炭疽病抗性进行分级，分级标准如下：一级：病斑直径X：0≤X<1mm；二级：病斑直径X：1≤X<2mm；三级：病斑直径X：2≤X<3mm；四级：病斑直径X：3≤X<4mm。

2.如权利要求1所述的一种枸杞炭疽病抗性评价方法，其特征在于：其中枸杞炭疽病菌株采用Colletotrichum gloeosporioides Pena.胶胞炭疽菌。

3.如权利要求1所述的一种枸杞炭疽病抗性评价方法，其特征在于：其中将枸杞叶片进行表面消毒并清洗具体是指，首先用有效氯浓度为1％的次氯酸钠溶液将枸杞叶片进行表面消毒，然后用灭菌蒸馏水清洗5-7次。