[发明专利]重组大肠杆菌固定化细胞及在利用木糖母液生产木糖醇中的应用

权利要求书

1.一种重组大肠杆菌固定化细胞，其特征在于所述重组大肠杆菌固定化细胞是将木糖还原酶基因和葡萄糖脱氢酶基因共同导入宿主大肠杆菌，获得含有双酶基因的重组大肠杆菌，然后将重组大肠杆菌进行发酵培养，取湿菌体细胞进行固定化，获得重组大肠杆菌固定化细胞；所述木糖还原酶基因核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示，所述葡萄糖脱氢酶基因核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示。

2.如权利要求1所述重组大肠杆菌固定化细胞，其特征在于所述发酵培养方法为：将重组大肠杆菌接种至含终浓度50 μg/mL链霉素的LB液体培养基，37 ℃，150 rpm培养2-8 h，以体积浓度2％的接种量转接至新的含终浓度50 μg/mL链霉素LB液体培养基中，于37 ℃，150 rpm条件下培养至OD值0.6-0.8，再加入终浓度0.1 mM IPTG，25 ℃条件下诱导12 h，离心，获得湿菌体细胞。

3.一种权利要求1所述重组大肠杆菌固定化细胞在利用木糖母液制备木糖醇中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述应用的方法为：以pH5.0~9.0 的磷酸缓冲液为反应介质，以重组大肠杆菌固定化细胞为催化剂，以木糖母液为底物，以葡萄糖为辅助底物构成反应体系，在20~45 ℃、100~600 rpm条件下进行反应，反应完全后，将反应液过滤，滤饼回收催化剂循环利用，滤液分离纯化，获得木糖醇；所述木糖母液为生产糖醇后产生的含木糖废液用活性炭脱色获得的。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述木糖母液中木糖含量为400~550 g/L。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述反应体系中，催化剂加入终浓度为20~150g/L、所述底物加入终浓度为10~200 g/L，所述葡萄糖加入终浓度为10~80g/L。

7.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述木糖母液在使用前先进行脱色预处理，所述脱色预处理方法为：在木糖母液中加入活性炭粉末，在30~60℃搅拌脱色2 h，过滤，收集滤液，获得脱色木糖母液；所述活性炭粉末粒径为50~300目，活性炭粉末质量添加终浓度为0.2-3%。