[发明专利]条件性敲除PRSS8基因在构建自发性结直肠炎癌动物模型中的应用

说明书

本发明属于基因工程领域，具体公开了条件性敲除PRSS8基因在构建自发性结直肠炎癌动物模型中的应用。本发明通过条件性基因敲除技术构建仅肠道组织发生PRSS8基因缺失的动物模型，该动物模型在3个月龄内将自发地发生结直肠炎症，随着年龄增大，发展成肠道腺瘤和腺癌。该模型将为揭示PRSS8基因的重要性提供直接证据，更重要的是该模型将为肿瘤预防以及抗炎和抗癌药物试验提供重要的工具。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体地说，涉及条件性敲除PRSS8 基因在构建自发性结直肠炎癌动物模型中的应用。

背景技术

应用全身性的基因敲除技术构建动物模型有很长的历史了，但应用条件性基因敲除技术构建独特的组织或器官基因缺失技术在近年来开始兴起，但由于基因的重要性及器官的重要性所限，条件性基因敲除引起表型的动物极为少见。

现有的用于肿瘤预防以及药物试验的动物模型，主要是通过化学药物诱导而构建的，然而化学药物诱导的缺点在于时间长，毒性大，且成瘤率不高。例如，AOM/DSS化学方法诱导小鼠结肠癌模型，采用致癌的化学诱导剂DSS喂养加上AOM腹腔注射，诱发结肠炎及结肠癌。

虽有文献曾公开了利用基因工程手段构建自发性的炎癌动物模型Muc2敲除小鼠，然而，该动物模型为全身性的Muc2基因敲除，而非特异性的条件性基因敲除。

因此，为了获得特定表型的动物模型，例如表现为慢性结肠炎、直肠炎、以及结直肠癌的动物模型，以对肿瘤预防以及抗炎和抗癌药物试验提供重要的工具，急需提供一种条件性基因敲除的自发性结直肠炎癌动物模型。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供条件性敲除PRSS8基因在构建自发性结直肠炎癌动物模型中的应用。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

本发明首先提供了条件性敲除PRSS8基因在构建自发性结直肠炎癌动物模型中的应用，通过条件性基因敲除技术构建仅肠道组织发生PRSS8基因缺失的动物模型，该动物模型在3个月龄内在肠道发生病变。

进一步地，通过条件性基因敲除技术敲除PRSS8基因的第3个外显子，使PRSS8基因发生表达缺失。

所述条件性基因敲除技术包括但不限于采用Cre/loxP重组系统，或CRISPR/Cas9系统。

进一步地，所述动物模型的构建方法包括如下步骤：

(1)构建Prss8基因敲除载体：

利用条件基因打靶法构建Prss8基因敲除载体；

(2)构建PRSS8基因敲除小鼠：

采用电转染的方法，将上述Prss8基因敲除载体转染进小鼠胚胎干细胞；将含有Prss8基因敲除载体的胚胎干细胞注射进C57/B6背景的胚囊，植入假孕的母鼠子宫内，产生嵌合体小鼠；

(3)构建p-Viliin-Cre小鼠：

在转基因Cre的小鼠的载体上连接一个P-Villin启动子；

(4)将步骤(2)构建的PRSS8基因敲除小鼠与步骤(3)构建的p-Viliin-Cre小鼠交配，获得Prss8/Cre转基因小鼠，即获得条件性敲除PRSS8基因的自发性结直肠炎癌动物模型。

本发明所述的应用中，所述病变包括结肠炎、直肠炎、结肠癌、直肠癌。

本发明进一步提供了一种自发性结直肠炎癌动物模型，所述自发性结直肠炎癌动物模型仅在肠道组织中发生PRSS8基因缺失，所述自发性结直肠炎癌动物模型在3个月龄内在肠道发生病变。

所述动物模型通过前述构建方法构建得到。