[发明专利]条件性敲除PRSS8基因在构建自发性结直肠炎癌动物模型中的应用在审
| 申请号： | 201810828230.5 | 申请日： | 2018-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN108913719A | 公开（公告）日： | 2018-11-30 |
| 发明（设计）人： | 杨万才;鲍永华;郭永臣 | 申请（专利权）人： | 江西佰延生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;王璐 |
| 地址： | 336000 江*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 动物模型 条件性 直肠炎 构建 敲除 基因 基因工程领域 直肠 肠道组织 基因敲除 基因缺失 技术构建 抗癌药物 试验提供 肿瘤预防 肠道 抗炎 腺癌 腺瘤 月龄 应用 证据 | ||
1.条件性敲除PRSS8基因在构建自发性结直肠炎癌动物模型中的应用，其特征在于，通过条件性基因敲除技术构建仅肠道组织发生PRSS8基因缺失的动物模型，该动物模型在3个月龄内在肠道发生病变。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，通过条件性基因敲除技术敲除PRSS8基因的第3个外显子，使PRSS8基因发生表达缺失。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述条件性基因敲除技术包括但不限于采用Cre/loxP重组系统，或CRISPR/Cas9系统。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述动物模型的构建方法包括如下步骤：
(1)构建Prss8基因敲除载体：
利用条件基因打靶法构建Prss8基因敲除载体；
(2)构建PRSS8基因敲除小鼠：
采用电转染的方法，将上述Prss8基因敲除载体转染进小鼠胚胎干细胞；将含有Prss8基因敲除载体的胚胎干细胞注射进C57/B6背景的胚囊，植入假孕的母鼠子宫内，产生嵌合体小鼠；
(3)构建p-Viliin-Cre小鼠：
在转基因Cre的小鼠的载体上连接一个P-Villin启动子；
(4)将步骤(2)构建的PRSS8基因敲除小鼠与步骤(3)构建的p-Viliin-Cre小鼠交配，获得Prss8/Cre转基因小鼠，即获得条件性敲除PRSS8基因的自发性结直肠炎癌动物模型。
5.根据权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，所述病变包括结肠炎、直肠炎、结肠癌、直肠癌。
6.一种自发性结直肠炎癌动物模型，其特征在于，所述自发性结直肠炎癌动物模型仅在肠道组织中发生PRSS8基因缺失，所述自发性结直肠炎癌动物模型在3个月龄内在肠道发生病变。
7.根据权利要求6所述的自发性结直肠炎癌动物模型，其特征在于，所述动物模型的构建方法包括如下步骤：
(1)构建Prss8基因敲除载体：
利用条件基因打靶法构建Prss8基因敲除载体；
(2)构建PRSS8基因敲除小鼠：
采用电转染的方法，将上述Prss8基因敲除载体转染进小鼠胚胎干细胞；将含有Prss8基因敲除载体的胚胎干细胞注射进C57/B6背景的胚囊，植入假孕的母鼠子宫内，产生嵌合体小鼠；
(3)构建p-Viliin-Cre小鼠：
在转基因Cre的小鼠的载体上连接一个P-Villin启动子；
(4)将步骤(2)构建的PRSS8基因敲除小鼠与步骤(3)构建的p-Viliin-Cre小鼠交配，获得Prss8/Cre转基因小鼠，即获得条件性敲除PRSS8基因的自发性结直肠炎癌动物模型。
8.权利要求6或7所述的自发性结直肠炎癌动物模型在筛选用于防治结肠炎、直肠炎、结肠癌或直肠癌药物方面的应用。
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